常见问题

我们提供的研究级和临床前级慢病毒产品，其功能滴度（感染滴度）均≥1E+8 TU/mL，具体滴度数值将体现在质检报告（COA）中。请注意，我们采用转导后 qPCR 测得的功能滴度（感染滴度），通常比通过 p24 检测获得的物理滴度高出 100–1000 倍。

慢病毒在 LTR 区间内的基因组长度约为 9.3kb。然而，为了确保良好的病毒产量，我们建议将 LTR 之间的基因长度控制在 6.5kb 以下。如果超过该限制，可能无法保证获得预期的滴度产量。

此外，如果首次生产的病毒滴度未达到预期，我们将启动第二批次生产，以确保结果的准确性和一致性。

慢病毒在 -80 °C 条件下可保存最长达 6 个月，但超过此时间后滴度可能会有所下降。为维持最佳滴度，建议避免反复冻融，并在首次解冻时将病毒分装成小份量。

第三代慢病毒包装系统具有多项优势。其最大特点是更高的生物安全性，由于不具备复制能力，且具有自失活机制，因此大大降低了潜在风险。该系统采用四质粒系统，分别携带不同的 HIV 基因，其中已去除 tat 基因，有助于进一步优化安全性。

此外，该系统的 5′ LTR 经过部分删除，并在其后接入如 CMV、RSV、EF1 或 U6 等强启动子，用于驱动 RNA 表达，不仅提升了转导效率，也降低了插入突变的风险。同时，U3 区段的删除使病毒具备“自失活”（SIN，self-inactivating）特性，进一步减少了非特异整合的风险，从而显著提升慢病毒载体在基因递送中的安全性。

我们采用的是第三代四质粒包装系统。

慢病毒的质量控制（QC）包括多项检测，旨在确保慢病毒载体在科研和治疗应用中的完整性与安全性。我们的放行质检主要关注转导后滴度（post-transduction titer），该指标反映病毒的真实感染能力（即功能滴度），可有效避免滴度被高估。

转导后 qPCR 检测流程为：用慢病毒感染细胞后，利用实时定量 PCR（qPCR）对病毒基因组进行定量，从而评估其实际转导效率。

转导效率检测还包括：将病毒稀释感染细胞，通过计数荧光阳性细胞，并结合明场与荧光显微镜图像分析，评估感染效果。

此外，我们还开展以下补充质控检测：

• p24 ELISA：检测 HIV 衣壳核心蛋白 p24，用于评估物理滴度；

• 支原体 PCR 检测：确认无支原体污染；

• 生物负荷检测：评估样品中是否存在活微生物；

• 内毒素检测（LAL 法）：使用鲎试剂检测是否存在细菌内毒素。

通过上述完整的质控体系，我们可确保所提供的慢病毒载体具有高品质、无污染，适用于后续的科学研究及治疗应用。

您只需提供 1–4 µg 的质粒即可，我们将负责后续用于慢病毒包装所需的质粒扩增和制备。除非您希望额外获得我们制备的质粒样品，否则无需另行购买质粒制备服务。请注意，我们的报价中所列周期已包含质粒制备所需时间。

细胞级和动物级慢病毒在纯化工艺上存在差异。两者在放行前均经过无菌过滤，但体内级病毒还需经过超速离心和超滤等更严格的纯化步骤。

细胞级慢病毒适用于细胞培养实验，而动物级慢病毒则可同时用于细胞实验和动物体内研究。