常见问题

N1-甲基假尿苷（m1Ψ）是一种修饰核苷，在被掺入 mRNA 中后发挥多项关键作用：

• 增强稳定性：掺入 m1Ψ 的 mRNA 显示出更高的稳定性，可延长其半衰期，从而实现更持久的蛋白表达。

• 降低免疫原性：m1Ψ 可显著减少未修饰 mRNA 所引发的免疫应答，避免炎症反应和分解，有利于提高治疗性递送效率。

• 提升翻译效率：m1Ψ 有助于促进核糖体结合和蛋白合成的起始过程，从而提高蛋白产量。

• 对 RNA 编辑酶具有抵抗性：m1Ψ 可有效抵御如 ADAR 等 RNA 编辑酶对 mRNA 序列中腺苷位点的编辑，保障蛋白合成过程中 mRNA 序列的完整性和准确性。

为了评估基于分子大小的 mRNA 纯度，我们会使用生物分析仪对 mRNA 样品进行检测。纯度的判定是通过计算主峰（目标片段 ±15%）在总信号中所占的比例来进行的。

在体外转录（IVT）过程中合成 mRNA 时，可能会生成残留的双链 RNA（dsRNA），这些杂质有可能在人体内引发不必要的免疫反应。为检测并定量分析微量 dsRNA 杂质，派真生物采用双抗体夹心法 ELISA（酶联免疫吸附法）进行检测。

检测流程如下：首先，在 ELISA 板孔中包被特异性识别 dsRNA 的单克隆或多克隆捕获抗体。当加入 mRNA 样品后，若其中含有 dsRNA，便会与捕获抗体结合。经过孵育后，洗去未结合的物质，再加入第二种带有标记的 dsRNA 特异性抗体。该检测抗体会与已结合的 dsRNA 形成“夹心”复合物。

该检测抗体通常与辣根过氧化物酶（HRP）等酶结合，可与底物反应产生可测信号（比色、荧光或发光）。信号强度与样品中 dsRNA 的浓度成正比，使用酶标仪读取信号，并与已知浓度的标准曲线进行比较，从而实现定量。

这种方法特异性强、灵敏度高，能够有效检测极低水平的 dsRNA 杂质，从而保障 mRNA 治疗产品的纯度与安全性。

我们采用优化的标准 mRNA 纯化流程，可将 dsRNA 降至极低水平，最终产品中的 dsRNA 含量低于 0.1%（通过 ELISA 验证）。如果您对 dsRNA 含量有更严格的要求，我们还可提供额外的工艺，在 mRNA 生产过程中进一步去除 dsRNA。详情请咨询我们的技术支持团队。

对于科研级别的定制 mRNA，当产量低于 1 mg 时，我们采用 LiCl 沉淀法进行纯化；对于产量大于 1 mg 的产品或现货 mRNA，我们则采用基于 HPLC 的 Oligo dT 纯化方法，以提高 RNA 的纯度。

我们标准的 LNP 包封 mRNA 浓度为 0.2 mg/mL，但最高可提升至 2 mg/mL。如需更高浓度的制剂，请联系派真生物技术支持团队

mRNA-LNP 可在 -80°C 条件下储存最长达 2 年。但需注意，mRNA-LNP 对反复冻融极为敏感，可能会显著降低其转导细胞或组织的能力。为避免此类问题，请提前告知您所需的分装体积。我们提供预分装的 mRNA-LNP 试剂盒，规格为 10 µL 或 50 µL。

在合适的储存条件下，mRNA 在 -80°C 可稳定保存至少 2 年，前提是避免反复冻融。稳定性也会因 mRNA 序列长度而有所差异，但我们的测试表明，mRNA 在经历多达 30 次冻融循环后仍可保持稳定。对于长期保存，推荐储存在 -80°C；如为短期使用，-20°C 也可接受。