定制AAV载体构建项目可以通过多种方式开展,我们的专业技术团队可协助您进行设计。为了加快项目设计流程,建议您提前准备以下问题的相关信息:
您是否已有转基因模板?如有,请将您的基因模板提供给我们进行验证。
您是否希望在没有模板的情况下过表达某个基因?如是,请提供基因编号、序列信息、宿主物种以及基因长度。
您是否希望构建用于基因表达调控的rAAV载体,如RNAi或CRISPR系统?如是,请提供目标基因编号、宿主物种以及基因长度。
您是否有特定的启动子序列希望使用?
您是否希望使用特定的荧光标签或报告基因?
您是否需要同时共表达多个转基因?
您的转基因总长度是否小于4.4kb?
请尽可能提供上述信息,以便我们为您量身定制最合适的AAV载体设计方案。
不同的AAV血清型是由其衣壳蛋白的氨基酸序列和三维结构差异所决定的,目前已发现或设计出的AAV血清型超过200种。rAAV衣壳蛋白在血清型上的差异会导致其在识别和结合细胞表面受体方面存在差异,从而影响其在不同组织和细胞类型中的感染效率。
派真生物的专业技术团队可根据已有文献中关于rAAV血清型感染效率的研究结果,结合我们的内部测试数据,协助您选择最适合您实验需求的血清型。然而,对于某些目标细胞类型或组织在文献中尚缺乏充分研究的情况,我们建议可通过携带报告基因的预实验来筛选并确定最理想的血清型。
rAAV基因组的包装上限约为5Kb,其中包括两端各145bp的ITR序列。因此,rAAV可容纳的转基因表达框约为4.5Kb。一个典型的rAAV转基因表达框通常包括启动子、目的基因以及终止信号。
派真生物的K104载体经过专门设计,旨在最大化目的基因的可用空间,采用了目前已知体内最小的哺乳动物启动子miniCMV(180 bp)和短终止子区域(50 bp),因此该载体最多可容纳长度为4.4Kb的目的基因。
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