vg/mL 是 vector genomes per milliliter(每毫升载体基因组数)的缩写,是AAV等病毒载体最常用的病毒滴度(viral titer)单位之一,用于表示每毫升病毒样品中含有多少个病毒基因组(viral genome)。
需要注意的是,vg 并不是表示具有感染能力的病毒颗粒数量,而是表示病毒基因组拷贝数。
vg/mL 的含义
- vg(vector genome):病毒基因组拷贝。
- mL(milliliter):样品体积。
例如:
- 1 × 10¹² vg/mL 表示每毫升病毒液中约含有 1万亿(10¹²)个病毒基因组。
- 5 × 10¹³ vg/mL 表示每毫升病毒液中约含有 50万亿(5 × 10¹³)个病毒基因组。
vg/mL 是如何测定的?
目前最常用的方法包括:
- qPCR(实时荧光定量PCR)
- ddPCR(数字PCR)
这两种方法都是检测病毒基因组中特定序列(如 WPRE、ITR、PolyA 或目的基因)的拷贝数,然后换算得到 vg/mL。
其中:
- qPCR:速度快、成本较低,是科研中最常见的方法。
- ddPCR:无需标准曲线,定量精度更高,重复性更好,近年来越来越多用于AAV质量检测。
vg/mL 与其他滴度单位的区别
为什么 AAV 常用 vg/mL,而不是 TU/mL?
AAV通常采用 vg/mL 作为标准滴度单位,主要原因包括:
- AAV不能像某些病毒一样稳定形成噬斑,因此PFU不适用。
- AAV的转导效率受血清型、启动子、细胞类型、给药方式等多种因素影响,因此TU/mL难以标准化。
- 使用 qPCR 或 ddPCR 测得的 vg/mL 重复性高、易于不同实验室之间比较,因此已成为科研和生产中的通用标准。
不过,vg/mL 只反映基因组拷贝数,不代表病毒颗粒是否具有感染活性。两个样品即使具有相同的 vg/mL,其实际转导效率仍可能不同,因为还会受到以下因素影响:
- 空壳(empty capsid)比例;
- 病毒基因组完整性;
- 衣壳质量与血清型特性;
- 纯度及杂质残留;
- 保存和运输条件等。
因此,在AAV质量评价中,通常需要结合vg/mL、空壳/满壳比例、感染活性(infectivity/transduction assay)、纯度及其他QC指标综合评估病毒质量。
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