π-Alpha™ 293细胞AAV高产技术平台派真生物专有的 π-Alpha™ 293 AAV 高产平台在三质粒转染系统中使用独特设计的 RC 质粒，可将各种血清型的 AAV 产量提高 3 至 8 倍。结合工艺生产过程中上游和下游 QbD 优化，总 AAV 产量可提高多达 10 倍。 单批AAV生产最多能提供1E+17 vg病毒颗粒，可满足大多数临床级和商业级AAV生产的需求。
优势
用独特设计的辅助RC质粒，提升293细胞体系AAV的产量可达10倍以上
生产工艺极大提升悬浮细胞产量达10~25倍
独特工艺极大减少关键杂质（HCD、内毒素等）
关键技术降低空壳率、提升感染滴度
知识产权
- 6项发明获得授权
- 2项发明在申请
高产辅助质粒（293细胞/三质粒体系）通过在 Rep-Cap 质粒中添加非编码调控元件获得高产RC 质粒，将 AAV 产量提高 3-8 倍（已申请专利）。
通过关键工艺参数DOE实验优化，悬浮293生产体系总产率提高10倍以上
细胞密度、质粒总量、质粒比例、转染试剂比例
DOE 工程参数 Ambr 反应器（赛多利斯）
搅拌速度 pH 溶氧 温度
DOE 裂解和收获条件
搅拌速度 密度 时间 温度
DOE 转染条件
200 L采用293细胞无血清悬浮工艺生产AAV产毒数据
总结
小批量的中试工艺开发策略成功地指导了使用无血清 293 悬浮细胞的 200 L 放大 AAV 生产工艺。
200 L 规模悬浮工艺实际生产AAV最高达7.3E+16 vg总裂解产量， >30% 回收率
透射电镜TEM
空壳率可低<5%，符合GMP的大规模生产
分析型超高速离心AUC
降低HCD的同时不影响AAV产率
通过对质粒进行独特的分子修饰，显著减少质粒 DNA 残基
独特分子改造质粒极大降低AAV病毒内质粒DNA残留（错包率），AAV产率无显著改变
具备可放大的超速离心去空壳工艺，可满足200~500 L规模的批生产量
| 优势 | 描述 |
| 产量提高 | RC质粒的设计使AAV产量提高3-8倍 |
| CPP优化将AAV总产量提高10倍 | |
| 更大规模优势 | 从125 mL到200 L（悬浮液）稳定的放大工艺 |
| 200 L悬浮产量达7.3E+16 vg（悬浮液） | |
| 更高安全性 | HCD残留量为30~90 ng/1E+13 vg（悬浮液） |
| 最佳全衣壳比率表现收获时(20~66%)和最终 (75~94%) | |
| 新型质粒设计方法减少了90%的包裹质粒杂质 |
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