
在慢病毒(Lentivirus)包装过程中,常见的污染包括以下几类:
1. 细菌污染
主要来源:操作环境不洁、试剂污染或细胞培养过程中感染。
影响:导致细胞死亡、病毒滴度下降,甚至影响实验结果。
2. 支原体污染
主要来源:长期培养的细胞、受污染的血清或试剂。
影响:支原体可改变细胞生理状态,影响慢病毒的表达和滴度。
3. 内毒素污染
主要来源:使用了受污染的大肠杆菌裂解产物(如质粒提取物)。
影响:内毒素会影响转染效率,甚至在动物实验中引起免疫反应。
4. 噬菌体污染
主要来源:受噬菌体感染的实验室试剂或细菌培养系统。
影响:可导致大肠杆菌裂解,从而影响质粒扩增和病毒包装。
5. 其他病毒或逆转录病毒污染
主要来源:细胞系本身(如HEK293T细胞可能带有HERVs)或实验室交叉污染。
影响:可能影响慢病毒的纯度和生物安全性。
6. 血清蛋白污染
主要来源:使用了含血清的培养基进行病毒收获。
影响:会干扰后续病毒纯化,影响滴度测定的准确性。
如何减少污染风险?
使用无菌操作技术,定期监测细胞和培养基。
采用无支原体污染的细胞系和试剂。
进行内毒素去除处理,如使用内毒素去除试剂或低内毒素级别的质粒制备方法。
确保实验环境无噬菌体污染,可定期检测培养基或细菌培养物。
采用无血清培养基进行病毒收获,以减少血清蛋白的污染。
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