
慢病毒包装后,病毒颗粒的产生和释放需要一定时间。通常情况下,根据所使用的慢病毒包装系统和细胞系,可以参考以下时间点:
1.24小时后换液
转染后大约 24小时 需要更换培养基,去除转染试剂和残留的有毒物质,加入新鲜培养基以利于病毒颗粒的产生。
2.48-72小时收集病毒上清
转染后 48小时 开始,慢病毒颗粒通常已经开始大量释放,可以开始收集病毒上清。为了提高病毒滴度,建议在 48小时和72小时 两个时间点分别收集上清。
3.重复收集
如果细胞状态良好(未明显死亡或脱落),可以继续在 96小时 再次收集病毒上清。收集上清时,需要注意避免细胞碎片污染。
上清处理建议
收集的病毒上清可以经过 0.45μm滤膜过滤,去除细胞碎屑。
根据需要,可以直接使用新鲜上清,也可以在 -80°C 冻存备用。
如果需要高滴度病毒,可进一步通过超速离心或PEG沉淀浓缩病毒。
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