包装腺相关病毒（AAV）通常需要三种质粒进行共转染：一种用于编码AAV的Rep和Cap蛋白，另一种用于AAV的基因组（含有目标基因），第三种用于提供腺病毒的辅助功能。
以下是一般步骤：
- 质粒准备：
- 准备三种质粒：
- pAAV-RepCap：包含AAV的Rep和Cap基因。
- pAAV-Target：包含目标基因及其启动子，适合于AAV的包装。
- pHelper：提供腺病毒的辅助基因（如E1区的基因）。
- 准备三种质粒：
- 细胞培养：
- 在适合的细胞系中（如HEK293细胞）培养细胞至70-80%的汇合度。
- 转染：
- 使用转染试剂（如PEI或Lipofectamine）将三种质粒以适当的比例转染到细胞中。
- 培养和收获：
- 转染后24-48小时，收集细胞培养上清液。
- 通过离心或过滤去除细胞残留，获得病毒颗粒。
- 病毒浓缩和纯化：
- 使用超离心或柱层析等方法浓缩和纯化AAV。
- 滴度测定：
- 通过qPCR或其他方法测定病毒的滴度。
在实际操作中，根据实验室的具体条件和目标可能需要调整步骤和比例。确保在操作过程中遵循相关的生物安全和伦理规定。
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