AAV感染细胞实验操作指南

2024年2月19日
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腺相关病毒(AAV)感染细胞实验是基因治疗和基因表达研究中常用的重要实验之一,它可以帮助研究人员评估AAV载体的包装效率、基因转导能力以及细胞内的表达情况。以下是进行AAV感染细胞实验的具体操作步骤:

1. 细胞培养

首先,选择适合的细胞系进行培养。常用的细胞系包括HEK293、HEK293T、HeLa、A549等。将细胞培养在含有适当培养基和补充物的培养皿中,并在37摄氏度、5%二氧化碳的培养箱中培养至细胞密度达到要求。

2. AAV病毒感染

将待检测的AAV病毒加入到细胞培养基中,使其与细胞接触。可以根据实验需要确定感染时间和病毒滴度。在感染过程中,适当摇动培养皿,确保病毒充分接触并渗透入细胞。

3. 细胞处理

感染一定时间后,根据实验设计对细胞进行不同的处理,如添加药物、改变培养条件等。根据实验需要,可以选择不同的时间点进行处理,以评估AAV病毒的转导效率和基因表达情况。

4. 细胞收集

在实验结束后,将细胞从培养皿中收集。可以采用胰酶消化等方法将细胞从培养皿中剥离,然后通过离心等方式收集细胞沉淀。

5. 分析和检测

收集的细胞可以进行多种分析和检测,包括细胞毒性检测、基因表达分析、蛋白质表达检测等。常用的方法包括PCR、Western blot、免疫荧光染色、流式细胞术等,根据实验目的选择合适的方法进行分析。

6. 数据分析

最后,对实验结果进行数据分析和统计处理,评估AAV感染细胞实验的效果和可靠性。根据实验结果,可以进一步优化实验方案和条件,提高实验的可重复性和准确性。

通过以上步骤,可以进行AAV感染细胞实验,并评估AAV载体的包装效率和基因表达能力,为基因治疗和基因表达研究提供重要的实验数据和支持。

关于派真

作为一家专注于AAV 技术十余年,深耕基因治疗领域的CRO&CDMO,派真生物可提供从载体设计、构建到 AAV、慢病毒和 mRNA 服务的一站式解决方案。凭借深厚的技术实力、卓越的运营管理和高标准的服务交付,我们为全球客户提供一站式CMC解决方案,包括从早期概念验证、成药性评估到IITINDBLA的各个阶段。

 

凭借我们独立知识产权的π-alphaTM 293 细胞AAV高产技术平台,我们能将AAV产量提高多至10倍,每批次产量可达1×10¹⁷vg,以满足多样化的商业化和临床项目需求。此外,我们定制化的mRNA和脂质纳米颗粒(LNP)产品及服务覆盖药物和疫苗开发的各个阶段,从研发到符合GMP的生产,提供端到端的一站式解决方案。

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