第三代慢病毒包装系统，包括三质粒系统和四质粒系统的组成
1️⃣ 第三代 三质粒系统（3-plasmid system）
特点：较早的第三代设计，拆分部分包装基因为单独质粒，去掉tat基因，提高安全性。
组成：
1.转运质粒（Transfer plasmid）
- 含有你要表达的目的基因（如CAR、shRNA、荧光蛋白等）
- 上下游被慢病毒LTR和必要的调控序列包围
2.包装质粒（Packaging plasmid）
- 提供 gag、pol、rev 等结构蛋白
- rev 有时包含在同一质粒中
3.包膜质粒（Envelope plasmid）
- 一般是 VSV-G 蛋白，用于使病毒能感染多种细胞类型
⚠️ 三质粒系统在安全性上比二代更好，但比四质粒略低，因为rev依然在同一质粒中。
2️⃣ 第三代 四质粒系统（4-plasmid system）
特点：安全性最高，完全拆分了所有关键基因，最常用于临床前和临床细胞治疗。
组成：
1.转运质粒（Transfer plasmid）
- 含目的基因和LTR
2.包装质粒 1（Gag-Pol plasmid）
- 提供 gag 和 pol 蛋白
3.包装质粒 2（Rev plasmid）
- 单独提供 rev 蛋白
4.包膜质粒（Envelope plasmid）
- VSV-G 蛋白
✅ 四质粒系统比三质粒系统多了一步拆分，将 rev 单独分离，提高了病毒复制的安全性，几乎不产生复制型病毒，符合临床标准。
第三代慢病毒包装系统优势
1.安全性更高
- 第三代慢病毒载体拆分了必要的病毒基因到多个质粒（通常四质粒系统），大大降低了重组成具有复制能力病毒的风险。
- 相比第一代和第二代，第三代不含大部分调控基因（如tat），安全性显著提高，更适合临床前和临床应用。
2.表达效率良好
- 第三代载体在靶细胞中仍能维持高效的基因表达，尤其适合干细胞、T细胞等细胞治疗相关的细胞类型。
3.临床应用广泛
- 许多CAR-T、TCR-T等细胞治疗产品都采用第三代慢病毒载体作为基因转导工具，符合国际监管安全要求。
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