
AAV(腺相关病毒)相比慢病毒要稳定得多,保存条件对其滴度影响相对较小。
1. 短期保存
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在 4℃ 下,AAV 可以稳定保存 1–2 周,适合短期使用。
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但超过这个时间容易出现感染力下降。
2. 长期保存(−80℃)
- 在 −80℃ 冷冻保存 时,AAV 基本可以保持 数月至数年 的稳定性。
- 很多文献和病毒包装公司说明书都提到,−80℃ 下 至少 1–2 年 滴度和感染力几乎没有明显下降。
- 有实验室报告使用 5 年以上的 AAV 仍然有良好活性,但推荐在 1–2 年内使用以保证实验稳定性。
若采用更优的保存策略,AAV 的 – 80℃保存时间可延长至2 年以上,甚至 5 年
- 高质量纯化:病毒载体需通过超速离心、层析等方法高度纯化,去除杂质(如细胞碎片等),减少保存过程中的非特异性降解;
- 避光与密封:AAV 对光照(尤其是紫外光)敏感,需用避光管(如棕色 EP 管)分装,并密封防止缓冲液挥发导致浓度变化;
- 定期质控:长期保存中,建议每 6-12 个月抽样检测病毒滴度(如 qPCR 测基因组滴度、细胞感染实验测功能滴度),确保活性未显著下降。
3. 影响稳定性的因素
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冻融循环:反复冻融会导致病毒颗粒聚集或降解,是影响滴度的主要原因。建议一次分装成小量,避免多次冻融。
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缓冲液:含缓冲液可增加冻存稳定性。
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冻存容器:低吸附管有助于减少病毒颗粒吸附在管壁上。
建议:
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短期实验(<2 周):4℃ 保存即可。
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中长期保存(数月–数年):−80℃ 冷冻保存,避免反复冻融。
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分装保存:小体积冻存,单次使用,减少冻融循环。
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尽量 1–2 年内使用,超过 2 年最好先做滴度验证。
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