aav载体的包装质粒和辅助质粒

在 AAV（腺相关病毒, Adeno-Associated Virus）的生产体系里，病毒颗粒的形成需要 转录载体（Transfer vector）、包装质粒（Packaging plasmid, Rep/Cap）、辅助质粒（Helper plasmid）。

1. 转录载体（Transfer vector）

• 含有 目标外源基因表达框架，两端被 ITR（Inverted Terminal Repeats） 包围。

• ITR 是 AAV 基因组复制和包装的必需元件。

• 常见结构：[ITR] — 启动子 — 外源基因 — polyA — [ITR]

• 启动子可以选择 CMV, CAG, hSyn, GFAP, TBG 等，实现组织特异性。

2. 包装质粒（Packaging plasmid, Rep/Cap）

• 提供 Rep 和 Cap 蛋白：

  • Rep：病毒 DNA 复制与基因组包装。

  • Cap：衣壳蛋白（VP1, VP2, VP3），决定血清型和组织嗜性。

• 不含 ITR，因此自身不会被包装。

• 可通过更换 Cap 基因 来获得不同 AAV 血清型（如 AAV2, AAV8, AAV9）。

3. 辅助质粒（Helper plasmid）

• 提供 AAV 复制和组装所需的 辅助功能。

• 野生型 AAV 在自然感染时依赖腺病毒（Adenovirus）或单纯疱疹病毒（HSV）提供辅助因子。

• 实验室生产时常用质粒携带腺病毒基因，如 E2A, E4, VA RNA，来模拟辅助作用。

• 常见构建：pHelper（源自腺病毒基因组片段）。

典型的 AAV 三质粒系统

• pAAV-Transfer（携带外源基因）

• pAAV-RepCap（提供复制/衣壳蛋白）

• pHelper（提供腺病毒辅助因子）

这种系统最为经典和常用。