一、AAV病毒（wild-type AAV，野生型腺相关病毒）
定义
AAV病毒指的是自然界中存在的、具有完整病毒生命周期的腺相关病毒。
它是一种 非致病性、依赖型 DNA 病毒，属于 Parvoviridae 科、Dependoparvovirus 属。
| 项目 | 内容 |
| 基因组结构 | 约 4.7 kb 的单链 DNA，包含三个主要区域：Rep、Cap、ITR。 |
| 依赖性 | 自身不能独立复制，需要“辅助病毒”（如腺病毒或疱疹病毒）共同感染时才会完成复制。 |
| 感染范围 | 能感染多种哺乳动物细胞（包括人类），但天然感染一般不会引起疾病。 |
| 组成成分 | – 衣壳蛋白（VP1/2/3） 由 Cap 基因编码。 |
| – 复制蛋白（Rep78/68/52/40） 由 Rep 基因编码。 | |
| – ITR（Inverted Terminal Repeat） 是复制和包装信号。 | |
| 功能 | 完整病毒可以感染、整合、复制并产生新的病毒颗粒。 |
二、AAV载体（recombinant AAV, rAAV）
定义
AAV载体是 人工改造的 AAV 病毒系统，保留衣壳结构，但删除了病毒自身的复制基因（Rep）和衣壳基因（Cap），改而装载外源治疗基因或报告基因。
改造原理
AAV 基因组原本是这样：
AAV 载体把中间的 Rep、Cap 删除，换成外源基因表达盒：
Rep 和 Cap 在包装时由“辅助质粒”提供，因此载体本身无法再复制或产生新的病毒颗粒。
| 项目 | 内容 |
| 复制能力 | 不能自我复制，也不会整合进宿主基因组（以游离环状形式存在）。 |
| 组成成分 | 只保留 ITR + 外源基因。衣壳仍然来自 Cap 蛋白。 |
| 生产方式 | 在包装细胞中共转染 3 个质粒（载体质粒、包装质粒、辅助质粒），产生重组 AAV 病毒颗粒。 |
| 用途 | 基因治疗（如Zolgensma, Luxturna）、功能基因研究、神经环路追踪等。 |
| 安全性 | 极高——没有 Rep/Cap，不能扩增，也几乎不整合入基因组。 |
三、AAV病毒 vs AAV载体 对比表
| 项目 | AAV病毒 (wild-type AAV) | AAV载体 (recombinant AAV) |
| 基因组成 | 含 Rep、Cap、ITR | 只保留 ITR + 外源基因 |
| 是否能复制 | 可以（需辅助病毒） | 不可以 |
| 是否能包装新病毒 | 可以 | 不可以 |
| 是否整合入宿主基因组 | 可能（部分整合） | 很少整合，主要以环状存在 |
| 生物安全性 | 较高（天然无致病性） | 极高（无自我复制能力） |
| 主要用途 | 病毒学研究、基因调控研究 | 基因治疗、研究工具 |
| 生产方式 | 需辅助病毒感染 | 三质粒系统共转染产生 |
| 代表产品 / 应用 | 基础研究（罕见） | Zolgensma、Luxturna、AAV-GFP等 |
四、三质粒包装系统（生产rAAV的常规方法）
rAAV 一般通过以下系统生产：
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载体质粒（vector plasmid）
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含有 ITR-外源基因-ITR。
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决定你要表达的内容。
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包装质粒（packaging plasmid）
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提供 AAV 的 Rep 和 Cap 基因。
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Cap 的种类决定血清型（如 AAV2, AAV9 等）。
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辅助质粒（helper plasmid）
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提供腺病毒的辅助因子（E2A, E4, VA RNA 等），让 AAV 能在无腺病毒情况下复制包装。
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三者共转染 HEK293 细胞 → 细胞内产生完整的 AAV 颗粒 → 提取、纯化 → 得到 重组 AAV 载体病毒颗粒。
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