
常规的慢病毒包装属于瞬时转染(Transient Transfection)。
在包装过程中,提供包装所需的质粒(gag/pol、rev、env、transfer vector)是暂时存在的,只在短时间内在宿主细胞中表达用于生产病毒,之后这些质粒会降解、丢失,不会整合进宿主基因组。
二、慢病毒包装体系结构
慢病毒(尤其是第三代系统)通常由以下 3~4个质粒组成:
质粒类型 | 主要功能 | 是否长期存在 |
Transfer Vector(转移载体) | 含目标基因 + LTR + ψ信号,用于装入病毒颗粒 | ❌ 暂时表达 |
Packaging Plasmid(包装质粒) | 提供 Gag、Pol、Rev(结构与酶蛋白) | ❌ 暂时表达 |
Envelope Plasmid(包膜质粒) | 常为 VSV-G,决定宿主范围 | ❌ 暂时表达 |
(可选)辅助调控质粒 | 如 Tat、Rev(第二代系统) | ❌ 暂时表达 |
三者共转染(co-transfection)到 HEK293T 等包装细胞后,短时间内产生大量病毒颗粒。
病毒收获后,这些质粒不再存在于宿主细胞中。
为什么这是“瞬时转染”?
-
这些质粒并没有整合到宿主细胞的基因组中。
-
它们只是在宿主细胞的细胞核内暂时性地存在,利用宿主细胞的转录和翻译机器来生产病毒的各个部件(RNA、蛋白)。
-
大约在转染后48-72小时,这些部件在细胞内组装成完整的、有感染能力的慢病毒颗粒,并分泌到细胞上清液中。
-
随着细胞分裂,这些没有被整合的质粒会逐渐被稀释、降解,蛋白和病毒的生产也会停止。这个过程是暂时的,通常只持续几天。
关于派真
作为一家专注于AAV 技术十余年,深耕基因治疗领域的CRO&CDMO,派真生物可提供从载体设计、构建到 AAV、慢病毒和 mRNA 服务的一站式解决方案。凭借深厚的技术实力、卓越的运营管理和高标准的服务交付,我们为全球客户提供一站式CMC解决方案,包括从早期概念验证、成药性评估到IIT、IND及BLA的各个阶段。
凭借我们独立知识产权的π-alphaTM 293 细胞AAV高产技术平台,我们能将AAV产量提高多至10倍,每批次产量可达1×10¹⁷vg,以满足多样化的商业化和临床项目需求。此外,我们定制化的mRNA和脂质纳米颗粒(LNP)产品及服务覆盖药物和疫苗开发的各个阶段,从研发到符合GMP的生产,提供端到端的一站式解决方案。
