AAV 是一种 依赖腺病毒或疱疹病毒辅助因子的“依赖性病毒”，自身无法独立复制或装配。
因此在实验室中，为了生产 重组 AAV（rAAV），我们需要用多个质粒共转染宿主细胞（通常是 HEK293T）来提供这些缺失的功能。
一、最常见的「三质粒系统（Triple Plasmid System）」
这是目前最主流的 AAV 包装体系。
| 质粒 | 主要功能 | 关键基因/元件 | 简述 |
| 载体质粒（Transfer Plasmid / AAV vector plasmid） | 提供病毒包装的目标基因序列 | 5′ITR – [启动子 + 转基因 + polyA] – 3′ITR | 这是被装入AAV颗粒内的重组基因组（无rep/cap） |
| 包装质粒（Rep/Cap Plasmid） | 提供 AAV 的 复制和衣壳蛋白 | rep + cap（如 AAV2 rep / AAV9 cap） | Rep 负责复制AAV DNA；Cap 决定血清型和组织嗜性 |
| 辅助质粒（Helper Plasmid） | 模拟腺病毒辅助感染，提供必要的辅助因子 | adenoviral genes：E2A、E4、VA RNA | 激活宿主信号通路，使AAV能在HEK293T中高效复制和装配 |
二、每个质粒的详细作用机制
| 功能模块 | 关键分子 | 作用机制 | 是否进入病毒颗粒 |
| Rep（replication） | Rep78, Rep68, Rep52, Rep40 | 识别并复制ITR，调控AAV DNA合成与包装 | ❌ 否 |
| Cap（capsid） | VP1, VP2, VP3 | 组装病毒衣壳；决定AAV血清型（如AAV2/8/9等） | ❌ 否 |
| Helper基因 | Adenoviral E2A/E4/VA RNA | 激活DNA复制、mRNA转运、抑制细胞凋亡 | ❌ 否 |
| 转移载体（目标基因） | ITR+Promoter+GOI+polyA | 被Rep识别并装入病毒颗粒 | ✅ 是（进入AAV颗粒） |
[1] pAAV-Vector: 提供目的基因（ITR包裹的GOI）
[2] pRepCap: 提供复制与衣壳蛋白
[3] pHelper: 提供腺病毒辅助因子
关于派真
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