一、时间因素（最常见）
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慢病毒表达需要时间，与腺相关病毒（AAV）或质粒瞬转不同，慢病毒整合入基因组后才开始稳定表达。
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通常荧光开始出现的时间：
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24 h：一般还未明显表达
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48–72 h：开始出现荧光信号
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72–96 h：达到峰值
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建议：先等到 48–72小时 再观察。
二、感染效率低
可能原因：
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病毒滴度太低（如 <10⁶ TU/mL）
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MOI（感染复数）太低
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靶细胞对慢病毒不敏感
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没有加 Polybrene 或感染增强剂
对策：
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增加病毒量（提高MOI）
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加入 Polybrene（4–8 μg/mL等增强感染
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尝试 离心感染（spinoculation） 提高吸附效率
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确认靶细胞为可感染的哺乳动物分裂/非分裂细胞（慢病毒可感染非分裂细胞）
三、报告基因或载体问题
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荧光基因被突变或未正确插入
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启动子活性不足（如CMV在某些细胞中沉默）
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病毒包装错误（如缺少包装质粒或Env质粒）
对策：
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检查质粒构建（测序验证）
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使用强启动子（如 EF1α、CAG、SFFV）
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对包装系统（通常3或4质粒系统）逐步排查
四、检测条件问题
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显微镜设置不当（如曝光时间或激发波长错误）
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荧光过弱，肉眼难辨
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细胞状态不好，导致表达受抑
对策：
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用阳性对照病毒（已知能发光）验证显微镜与检测条件
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用流式细胞仪检测低水平荧光
关于派真
作为一家专注于AAV 技术十余年，深耕基因治疗领域的CRO&CDMO，派真生物可提供从载体设计、构建到 AAV、慢病毒和 mRNA 服务的一站式解决方案。凭借深厚的技术实力、卓越的运营管理和高标准的服务交付，我们为全球客户提供一站式CMC解决方案，包括从早期概念验证、成药性评估到IIT、IND及BLA的各个阶段。
凭借我们独立知识产权的π-alphaTM 293 细胞AAV高产技术平台，我们能将AAV产量提高多至10倍，每批次产量可达1×10¹⁷vg，以满足多样化的商业化和临床项目需求。此外，我们定制化的mRNA和脂质纳米颗粒（LNP）产品及服务覆盖药物和疫苗开发的各个阶段，从研发到符合GMP的生产，提供端到端的一站式解决方案。
