
慢病毒在4°C(冰箱)条件下,可以短期存放,但建议不要超过1周。理想情况下,应在48小时内使用。
慢病毒的包膜是脂质双分子层,这种结构在4°C下比在-80°C下不稳定得多。即使放在4°C,病毒的活性也会随着时间推移而逐渐下降。
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活性衰减:在4°C环境下,慢病毒的感染滴度(Titer)会每天都有所损失。存放时间越长,用于实验时能成功感染细胞的病毒颗粒就越少,可能导致实验失败(如感染效率过低)。
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反复冻融是主要杀手:慢病毒最忌讳反复冻融。每一次冻融都会导致大量的病毒颗粒破裂失活。因此,绝对避免将刚从-80°C取出的病毒在4°C化冻后,又重新冻回-80°C。
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污染风险:长期在4°C存放,尤其是在非无菌条件下频繁取用,会增加细菌或真菌污染的风险。
为了最大限度地保持慢病毒的活性,请遵循以下准则:
1. 长期储存
温度:-80°C 是长期储存的标准温度。
条件:
- 使用专门的病毒保存液或无血清培养基,并加入适量浓度的蛋白(如5-10%的FBS或BSA)作为保护剂。
- 进行小量分装。例如,根据您单次实验的用量(如100μL/管),将病毒原液分装到多个无菌的冻存管中。
效果:在-80°C妥善分装保存的慢病毒,可以稳定存放6个月到1年,滴度不会有显著下降。避免使用自动除霜的冰箱,因为温度波动会损害病毒。
2. 短期使用与处理
从-80°C取出后:
- 推荐方法:将分装的病毒管置于冰上或4°C冰箱中缓慢融化。切勿使用37°C水浴或室温融化,高温会迅速使病毒失活。
- 融化后:轻轻混匀(可用掌间揉搓或低速涡旋),然后立即使用。如果需要短暂放置,请放在冰上,并尽量在数小时内用完。
如果确实需要4°C短期存放:
- 如上所述,请尽量在24-48小时内使用。
- 如果存放时间超过一周,请预期病毒的感染效率会有明显下降,可能需要增加病毒用量或重新滴定滴度。
核心要点:为了获得最佳实验结果,请始终遵循 “小量分装,存于-80°C,用时冰上融化,尽快使用” 的原则。
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