慢病毒荧光蛋白载体是一类将 荧光蛋白编码基因（如 EGFP、mCherry、mKO2 等） 插入到慢病毒表达载体中的工具。通过包装成慢病毒颗粒后，可以稳定整合进宿主细胞基因组，实现 长期、稳定的荧光表达。
一、载体的核心组成
典型慢病毒荧光表达载体包含：
1. LTR（长末端重复序列）
-
5’LTR：启动反转录
-
3’LTR：终止反转录（多数为自灭活 SIN 设计，提高安全性）
2. Psi (Ψ) 包装信号
-
决定基因能否被包装进病毒颗粒。
3. 荧光蛋白基因
常用荧光蛋白包括：
| 荧光蛋白 | 颜色 | 特点 |
| EGFP | 绿色 | 表达强、用途最广 |
| mCherry | 红色 | 光稳定度高 |
| mTagBFP2 | 蓝色 | 光谱分离度好 |
| mKate2 | 深红 | 适用于动物成像 |
| ZsGreen | 亮绿色 | 亮度高但体积大 |
4. 启动子（Promoter）
决定荧光蛋白表达水平。
常用启动子：
-
CMV：强启动子，通用
-
EF1α：常用于哺乳动物细胞，稳定性高
-
UbC / PGK：适度表达，避免毒性
-
CAG：极强表达，适用于多种细胞类型
-
细胞类型特异启动子 （如 Syn、GFAP、CD11b）
5. 筛选标记（可选）
-
Puro, Neo, Bla, Hygro：抗性筛选
-
也可使用“双荧光”设计
6. IRES 或 2A 序列
用于同时表达荧光蛋白和其他基因：
-
IRES：表达比例不均匀
-
P2A / T2A / E2A：更常用，效率高，表达更均匀
二、荧光慢病毒载体的常见应用
✓ 1. 稳定标记细胞系
用于追踪细胞增殖、迁移、存活。
✓ 2. 转染效率评估
荧光强度可直接反映感染效率。
✓ 3. 构建报告基因系统
例如：
-
GFP 报告基因用于活性检测
-
mCherry 标记细胞核或细胞膜
✓ 4. 多色细胞示踪
例如：绿色标记组、红色标记对照组。
✓ 5. CAR-T、干细胞转导验证
用于确认转导效率与细胞扩增情况。
三、常见的慢病毒荧光载体举例
| 载体名称（示例） | 特点 |
|---|---|
| pLenti-CMV-EGFP | 经典 GFP 表达 |
| pLV-EF1a-mCherry-Puro | 红色荧光 + 嘌呤霉素筛选 |
| pLenti-CAG-ZsGreen | 极高表达亮度 |
| pLV-UbC-mKO2 | 中等表达，更低毒性 |
| Bicistronic：GFP-P2A-Gene | 基因与 GFP 同时表达 |
关于派真
作为一家专注于AAV 技术十余年，深耕基因治疗领域的CRO&CDMO，派真生物可提供从载体设计、构建到 AAV、慢病毒和 mRNA 服务的一站式解决方案。凭借深厚的技术实力、卓越的运营管理和高标准的服务交付，我们为全球客户提供一站式CMC解决方案，包括从早期概念验证、成药性评估到IIT、IND及BLA的各个阶段。
凭借我们独立知识产权的π-alphaTM 293 细胞AAV高产技术平台，我们能将AAV产量提高多至10倍，每批次产量可达1×10¹⁷vg，以满足多样化的商业化和临床项目需求。此外，我们定制化的mRNA和脂质纳米颗粒（LNP）产品及服务覆盖药物和疫苗开发的各个阶段，从研发到符合GMP的生产，提供端到端的一站式解决方案。
