aav病毒样品反复冻融会使蛋白质衣壳破碎吗

2025年11月28日
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一般来说,AAV病毒样品反复冻融确实会增加衣壳蛋白(VP1/VP2/VP3)受损或破碎的风险,从而导致滴度下降、感染效率变差。

反复冻融对AAV衣壳的影响机制

影响因素 说明
冻融过程产生冰晶 冻结时形成的冰晶可对病毒颗粒造成物理性损伤,破坏衣壳结构。
pH与离子浓度变化 缓冲液在冻结过程中可能局部浓缩或pH改变,使蛋白结构不稳定。
表面张力变化 冷冻-融解交替使病毒颗粒承受机械应力,增加衣壳断裂概率。
蛋白质本身易变性 蛋白衣壳重复应力后更易部分解聚或变性失活。

多数研究和实验室经验一致认为:AAV不建议冻融超过 1–2 次,超过 3 次可能显著降低感染滴度甚至部分颗粒破损。

冻融对实验结果的潜在影响

影响 表现
颗粒结构破坏 ssDNA外露,衣壳破裂或松动
滴度下降 qPCR测基因组滴度变化小,但感染滴度IFU/GC比明显降低
传递效率变差 动物实验、体外细胞感染效率下降
免疫学性质改变 衣壳完整性受损可能影响抗体结合及检测信号

注意:即使衣壳未完全破裂,功能滴度也可能显著下降。qPCR仅测基因组滴度,无法反映功能性损伤。

避免AAV冻融损伤的建议

操作 建议
分装储存 小体积Aliquot(如10–50 μL/管),避免重复冻融
存放温度 长期 −80℃,短期使用周期内可置于 −20℃
缓冲体系 推荐含 0.001–0.01% Pluronic F68 或 0.001% Tween-20 减少吸附与变性
使用时处理 取用前尽量低温快速融化,避免长时间室温暴露

反复冻融会增加AAV衣壳蛋白破碎风险,导致滴度与感染效率下降。建议一次冻融后尽快使用,并通过小量分装来避免损失。

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