AAV(腺相关病毒)可以非常方便地携带荧光标签基因,用于观察感染效率、体内定位、筛选阳性细胞等。
1.AAV常携带的荧光基因
常见荧光蛋白包括:
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GFP / EGFP(绿色)
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ZsGreen(更亮、更稳定的绿色)
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mCherry(红色)
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tdTomato(强亮度红色双体)
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EYFP(黄色)
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CFP(青色)
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mScarlet(高亮红色)
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far-red 类荧光蛋白 如 mKate2、iRFP(适合体内成像)
选择时考虑:亮度、稳定性、光漂白耐受性、体内成像深度。
2.AAV荧光标签的常用表达方式
(1) 直接表达(强启动子驱动)
例:CAG-GFP、CMV-EGFP、EF1α-GFP
优点:亮,表达强
缺点:可能影响组织特异性,某些组织 CMV 可能沉默
(2) Cre/Lox 系统荧光示踪
如:AAV-Cre + Rosa26-LSL-GFP 小鼠
用于条件性标记、示踪特定细胞群。
3.AAV带荧光的常见应用场景
| 应用 | 描述 |
| 感染效率监测 | 观察细胞/组织中 GFP 表达情况,评估滴度有效性 |
| 细胞示踪 | 长期观察特定细胞群迁移、分化 |
| 神经环路示踪 | AAV-ChR2–EYFP、AAV-hSyn-GFP 等常用于神经科学 |
| 体内成像 | 红/远红荧光用于深层组织成像 |
| 阳性细胞分选 | FACS 直接分选 GFP+/mCherry+ 细胞 |
4.注意事项
(1) 插入基因长度限制
AAV 的包装能力约 4.7 kb。
(2) 启动子的选择影响荧光强度
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强启动子:CMV、CAG → 亮度高
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神经元:hSyn、CamKII
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肝脏:TBG(TBG-GFP 常用于肝脏特异表达)
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心脏:cTnT
(3) 荧光出现时间
AAV 感染后一般在:
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24–48 h:出现弱荧光
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3–7 天:荧光明显
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2–3 周:体内达到峰值
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