AAV 感染效率低怎么办？

在 AAV（腺相关病毒）实验中，感染效率低、表达弱或无表达是科研人员最常遇到的问题之一。
即使使用了高滴度 AAV，也可能仍然达不到预期效果。

事实上，AAV 感染效率受病毒本身、实验条件以及实验模型等多种因素共同影响。将从多个角度系统分析 AAV 感染效率低的常见原因，并给出对应的优化建议。

一、AAV 感染效率低的常见表现

• 荧光信号弱或无荧光

• 阳性细胞比例低

• 表达出现但不稳定，随时间下降

• 不同批次或不同个体之间差异明显

二、AAV 感染效率低的主要原因与对策

1. AAV 血清型选择不匹配

不同 AAV 血清型对不同细胞和组织具有明显的嗜性差异。

常见情况：

• 所选血清型不易进入目标细胞

• 体外有效，体内转导效率低

优化建议：

• 根据目标细胞 / 组织选择合适血清型

• 必要时进行血清型对比预实验

• 体外实验中，可优先测试 AAV2、AAV6、AAV9 等常用血清型

2. 病毒滴度或 MOI 设置不合理

• 滴度过低：感染不足，阳性率低

• 滴度过高：细胞毒性增强，反而影响表达

优化建议：

• 建议进行 MOI 梯度实验

• 寻找最低有效滴度而非最高滴度

• 避免“盲目堆滴度”

3. 启动子与目标细胞不匹配

启动子活性具有明显的细胞类型特异性。

常见问题：

• CMV 在某些细胞或体内组织中易沉默

• 启动子强度不足，导致表达偏低

优化建议：

• 选择与目标组织匹配的启动子

• 体内实验优先考虑组织特异性启动子

• 避免“万能启动子”思维

4. 目的基因或载体设计问题

• 目的基因过大，接近或超过 AAV 包装上限

• 序列存在毒性或影响细胞生存

• ITR 或表达框结构异常

优化建议：

• 确保基因总长度 ≤ 4.7 kb

• 必要时进行基因截短或双 AAV 设计

• 使用经验证的 AAV 载体结构

5. 细胞状态或实验条件不佳

体外实验中常见：

• 细胞密度过高或过低

• 细胞活性差或传代次数过多

• 培养基条件不适合病毒转导

优化建议：

• 感染时细胞处于对数生长期

• 合理控制细胞密度

• 按推荐条件进行病毒感染

6. 动物体内免疫反应影响转导

在体内实验中，即使病毒成功进入体内，也可能因免疫反应导致表达受限。

常见原因：

• 既往 AAV 暴露史

• 高剂量引发免疫清除

• 空壳比例或杂质偏高

优化建议：

• 控制注射剂量

• 选择高纯度 AAV

• 必要时优化给药方式或时间点

三、AAV 感染效率低的系统化排查思路

当出现 AAV 感染效率低的问题时，建议依次排查：

1️⃣ 血清型是否适合目标细胞 / 组织

2️⃣ 滴度与 MOI 是否经过梯度验证

3️⃣ 启动子是否与模型匹配

4️⃣ 载体结构与基因长度是否合理

5️⃣ 实验条件和样本状态是否稳定

四、总结

AAV 感染效率低，往往不是单一因素导致的。
血清型、滴度、启动子、载体设计和实验模型之间的任何不匹配，都可能影响最终的转导效果。