AAV 是否可以携带荧光标签？

可以。腺相关病毒（AAV）载体可通过携带荧光蛋白编码序列，实现对转导效率、表达细胞及组织分布的直观示踪。该策略在体外细胞实验和体内动物实验中均被广泛应用，是AAV载体设计中的常见方案。

AAV 携带荧光标签的常见设计方式

1. 荧光蛋白作为报告基因单独表达

载体结构示例：启动子 – GFP / mCherry

特点与应用：

• 结构简单，表达稳定

• 常用于评估 AAV 感染效率、组织分布和表达范围

• 适合作为阳性对照或示踪载体

2. 目的基因与荧光蛋白融合表达

载体结构示例：Gene–GFP 或 GFP–Gene

特点与应用：

• 可用于蛋白定位和表达追踪

• 需根据目的蛋白特性选择 N 端或 C 端融合

• 融合表达可能影响蛋白结构或功能，需谨慎评估

3. 目的基因与荧光蛋白共表达

常见方式：

• IRES 共表达

• 2A 肽（如 P2A、T2A）共表达

载体结构示例：Gene–P2A–GFP

优势：

• 目的基因与荧光蛋白分别表达，不影响蛋白功能

• 同一转导细胞可通过荧光信号进行识别

• 是 AAV 过表达项目中应用最广泛的设计方案

AAV 荧光标签设计的关键注意事项

1. AAV 包装容量限制

AAV 最大包装容量约为 4.7 kb（含 ITR）

常见荧光蛋白大小参考：

• EGFP：约 0.72 kb
• mCherry：约 0.7 kb
• tdTomato：约 1.4 kb

当目的基因较大或使用组织特异性启动子时，需提前评估整体载体长度，避免超载影响包装效率和病毒质量。

2. 启动子选择

• 强启动子（CMV、CAG）：表达高，通用性强

• 组织特异性启动子：表达精准，但长度通常较大

• 启动子大小与表达需求需在功能与容量之间进行平衡

3. 应用场景差异

体外细胞实验：GFP、mCherry 等常规荧光蛋白均适用

体内动物实验：

• 红色荧光蛋白组织穿透性更好
• 绿色荧光在部分组织中易受自发荧光干扰