在慢病毒过表达实验中,对照组的设计非常关键。合理设置对照组可以区分目的基因的效应与病毒感染或载体本身的非特异性影响。常用对照组及其表示方式如下:
1. 过表达组(Experimental Group)
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表示方式:OE-Gene
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示例:OE-Bcl2(表示过表达 Bcl2 的慢病毒)
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作用:表达目的基因,用于评估过表达对细胞功能的影响。
2. 空载体对照(Empty Vector Control)
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表示方式:Vector / EV(Empty Vector)
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示例:pLV-Vector(使用与实验组相同的载体骨架,但不含目的基因)
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作用:排除载体本身(如启动子、荧光标记、抗性基因)对细胞的潜在影响,是过表达实验中最核心的对照组。
3. 未处理对照(Untreated Control / Mock)
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表示方式:Untreated / Mock
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示例:不接触病毒的细胞
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作用:排除病毒感染过程(如多聚阳离子 Polybrene 的使用、感染步骤、胰酶消化等)对细胞的非特异性影响。
4. 荧光蛋白对照(仅当载体带标记时)
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表示方式:GFP / mCherry
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示例:pLV-GFP(使用空载体,将目的基因替换为荧光蛋白)
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作用:排除荧光蛋白本身对细胞功能的影响,同时保持载体结构一致。
5. 内源性对照(Endogenous / Wild-type)
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表示方式:WT / Parental
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作用:用于比较过表达后与细胞内源基因水平的差异,通常通过 qPCR 或 Western blot 验证。
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注意:在大多数过表达实验中,内源性对照不是必需的单独对照组,而是作为表达水平参考。
对照组设置示例表格
| 组别 | 病毒类型 | 标注符号 | 备注 |
| 过表达组 | 目的基因慢病毒 | OE-Gene | 例:OE-Bcl2 |
| 空载体对照 | 空载体慢病毒 | Vector / EV | 例:pLV-Vector |
| 未处理组 | 无病毒处理 | Mock / Untreated | 排除操作影响 |
| 荧光蛋白对照 | 空载体带荧光标记 | GFP / mCherry | 例:pLV-GFP,仅当载体带荧光标记时 |
注意事项
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病毒匹配:对照病毒应与实验病毒完全一致(载体骨架、启动子、荧光标记、抗性基因)。
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MOI 一致性:实验组与对照组的感染复数(MOI)必须相同。
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验证实验:需通过 qPCR 或 Western blot 确认过表达效率,对照组应不表达目的基因。
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优先级:空载体对照(Vector / EV)是最核心的对照组,建议优先采用;未处理组和荧光蛋白对照可根据实验需求补充。
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