腺病毒载体作为一种常用的基因传递工具，在基因治疗、疫苗开发以及基础生物学研究中扮演着重要角色。它们可以高效地将基因传递到宿主细胞内，而不会整合到宿主基因组中，从而减少了基因治疗相关的风险。根据其基因组结构和生物安全性的不同，腺病毒载体可以分为几种不同的类型。
腺病毒载体的分类主要基于其基因组的删除范围，可以分为第一代、第二代和缺陷型(无助病毒的腺病毒载体)三大类：
第一代腺病毒载体：这类载体去除了E1区，使其无法在正常的宿主细胞中复制，同时在载体中插入外源基因。然而，第一代载体的缺点是包含其他病毒编码区，可以在特定的细胞系内恢复复制能力，并可能引发宿主免疫反应。
第二代腺病毒载体：为降低宿主免疫应答并提高外源基因的载量，第二代载体进一步删除了E2或E4区域，或者同时删除E1和E2/E4区域的部分或全部。
缺陷型腺病毒载体：这类载体是迄今为止最优化的腺病毒载体，它们除了必要的包装序列外，去除了所有的病毒基因，从而最大限度降低免疫原性并提高外源基因的包装容量。由于缺乏复制功能，它们需要在辅助细胞系里进行包装，这些辅助细胞系提供了缺失的病毒功能。
腺病毒载体的包装方法指的是将重组腺病毒DNA制备成可以感染目标细胞的病毒颗粒的过程。常见的包装步骤包括：
制备重组腺病毒质粒：包含外源基因的质粒与提供其他病毒基因的包装辅助质粒(如针对第三代载体)同时转染到包装细胞系，如HEK293细胞。
传染与复制：经过一段时间的培养，细胞内开始表达病毒蛋白并打包病毒DNA，形成病毒颗粒，然后将细胞收获并通过裂解得到病毒。
病毒纯化：使用梯度离心、离子交换层析、亲和层析等多种方法将病毒颗粒从细胞碎片、未包装的病毒DNA和其他杂质中分离出来。
病毒滴度测定：通过荧光定量PCR、酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞仪等技术测定病毒 的数量和质量。
当前的研究正在不断改进腺病毒载体的包装技术，如开发新型的辅助细胞系、改善纯化方法、提升包装效率等，以期使腺病毒载体在临床上具有更高的安全性和效率。随着这些技术进步的催化，腺病毒载体在未来的生物医药领域将有着更广阔的应用前景。
