1、血清型选择(根据不同感染部位进行选择)

血清型 感染表面 感染部位及水平 受体
AAV2 感染基底层远大于表层 气道细胞:低水平或无 硫酸肝素(Heparin Sulfate)
肺泡细胞:低水平或无
支气管上皮:低水平或无
 气道平滑肌:中等水平
AAV5 感染基底层远大于表层 气道细胞:中等水平 PDGFR,2-5联唾液酸受体
 肺泡细胞:中等水平
AAV6 表层 气道细胞:中等水平 唾液酸糖蛋白
 肺泡细胞:高等水平
 支气管上皮:中等水平
 气道平滑肌:低等水平
AAV9 基底层和表层 气道细胞:低等水平 半乳糖基葡聚糖
肺泡细胞:中等水平

常用启动子:广泛表达启动子CMV、CAG、EF1a
注射方式:鼻内递送或者气管内递送两种方法

 

2、小鼠肺部AAV注射方法

鼻内滴注

滴鼻比较直接,操作简单且对设备要求低,缺点是AAV颗粒容易沉积在上呼吸道和胃肠道,如果需要有效感染到下呼吸道,则可能需要更大剂量的AAV才能。慢慢地将AAV悬液通过小鼠鼻孔内壁逐滴滴入,为保证最大地肺部感染效率,最小体积为50μL(每个鼻孔25μL),最大体积为75μL(每个鼻孔37.5μL)。待小鼠呼吸恢复正常后,再滴入一次75μL的 AAV悬液。

内镜辅助口腔气管插管术

口腔气管插管术能够将病毒载体直接灌输入肺中,避免了上呼吸 道病毒颗粒的损失。由于几乎所有AAV病毒颗粒都会到达肺内,所 以要严格控制AAV的使用量。与滴鼻方法相比,口腔气管插管术需 要一些特殊设备,操作起来稍有难度。 用0.35mL的注射器通过导管按照3μL/g体重输入AAV;立刻使用 1mL无针头注射器输入0.2mL空气,并重复2-3次以减少AAV在导管内的残留。

气管内注射

与鼻内滴注相比,气管内注射能够提高AAV进入肺部的效率,而与口腔气管插管法相比,设备更简单,操作更容易。但是,气管内注射具有外科手术风险,包括出血、切口开裂、感染以及较长的恢复期。不仅如此,由于小鼠器官窄小,也很容易出现失误,将AAV注射到器官周围组织或食管中去。按照3μL/g体重输入AAV。