aav生产工艺流程

腺相关病毒（AAV）的生产工艺通常涉及多个步骤，包括质粒构建、细胞培养、病毒包装、收集和纯化等。以下是AAV生产的一般流程图描述：

AAV生产工艺流程

1. 质粒构建
   • 设计并合成包含目的基因的载体质粒（Transfer plasmid）。
   • 准备包装质粒（Packaging plasmid）和包膜质粒（Envelope plasmid）。
2. 转染细胞
   • 将三种质粒共转染到适合的细胞系（如HEK293T细胞）中。
   • 使用转染试剂（如PEI、脂质体）以提高转染效率。
3. 病毒包装
   • 在转染后，细胞内开始产生AAV颗粒。
   • 经过一定时间（通常48-72小时），细胞会释放病毒颗粒到培养基中。
4. 收集病毒
   • 从细胞培养基中收集病毒颗粒，通常通过离心或过滤去除细胞残骸。
5. 病毒纯化
   • 使用超速离心、亲和层析等方法对病毒颗粒进行纯化。
   • 目标是去除杂质，提高病毒的纯度和滴度。
6. 病毒滴度测定
   • 使用qPCR、ELISA或其他方法测定AAV的滴度，评估病毒的感染能力。
7. 病毒储存
   • 将纯化后的AAV颗粒分装并储存于适当条件下（通常是-80°C），以备后续实验或临床应用。

流程图示意

以下是一个简化的AAV生产工艺流程图：

质粒构建 → 转染细胞 → 病毒包装 → 收集病毒 → 纯化病毒 → 滴度测定 → 储存

详细步骤

• 质粒构建：
  • 选择合适的载体和目标基因，进行克隆和扩增。
• 转染细胞：
  • 细胞培养至适宜密度，然后加入转染试剂和质粒混合物。
• 病毒包装：
  • 细胞在适宜培养条件下培养，经过48-72小时的病毒表达。
• 收集病毒：
  • 通过离心和过滤去除细胞残渣，收集上清液中的病毒。
• 病毒纯化：
  • 使用超速离心分离病毒颗粒，后续通过层析进一步纯化。
• 滴度测定：
  • 利用qPCR等技术评估AAV的滴度，确保质量。
• 储存：
  • 将纯化的AAV颗粒分装并冷冻保存，以便后续使用。