AAV三质粒包装系统是一种用于制备腺相关病毒（Adeno-associated virus, AAV）载体的系统，主要用于基因治疗中的基因递送。三质粒系统主要通过三个质粒协同表达来完成AAV载体的包装过程。
以下是三质粒系统的工作原理：
1. 三质粒组成
在AAV三质粒包装系统中，涉及三个关键质粒：
转移质粒（rAAV质粒）：这个质粒含有要被传递的目标基因序列，通常位于两个AAV反向末端重复（ITRs）序列之间。ITR是唯一从野生型AAV中借用的序列，这些序列对于rAAV包装和整合至宿主细胞的基因组至关重要。
辅助质粒（Rep-Cap质粒）：辅助质粒携带必需的rep和cap基因，这些基因编码AAV的复制（Rep）和衣壳（Cap）蛋白。Rep蛋白负责复制rAAV质粒，而Cap蛋白负责形成能够包裹rAAV质粒DNA的病毒盖壳。
助病毒质粒（Ad Helper质粒）：助病毒质粒提供额外的Adenovirus蛋白，这些蛋白在包装过程中是必需的但不会被包含在最终的rAAV颗粒中。这些蛋白的功能包括增强病毒的复制、组装和细胞释放过程。
2. 包装过程
当这三个质粒共同转染到包装细胞（如HEK293细胞）中时，各自表达相应的蛋白和基因元件，实现AAV病毒的包装：
载体质粒上的目的基因在ITRs的帮助下形成一个完整的AAV基因组。
包装质粒中的cap和rep基因表达相应的AAV蛋白，rep蛋白负责复制AAV基因组，而cap蛋白形成AAV的衣壳。
辅助质粒中的腺病毒辅助基因提供包装所需的支持，增强AAV的复制和包装效率。
3. 结果
在这个系统中，AAV基因组被包裹在由cap蛋白形成的衣壳中，形成完整的AAV颗粒。随后，产生的AAV颗粒可以收集并纯化，用于基因递送实验。
三质粒系统的优势
- 高效：三质粒系统可以在较短时间内获得高滴度的AAV载体。
- 灵活性：不同目的基因可以很容易地插入载体质粒中，适应性强。
- 安全性：相比其他病毒载体系统，AAV不引起明显的免疫反应且不整合入宿主基因组，较为安全。
AAV三质粒包装系统是一种有效、可靠的基因递送系统，被广泛应用于基因治疗和基础研究中。