慢病毒包装第三代系统，也称为四质粒系统，是在第二代慢病毒包装系统（三质粒系统）的基础上发展起来的，主要目的是为了提高安全性。
以下是第三代慢病毒包装系统的一些关键特点：
1、组成：第三代慢病毒包装系统包含四个质粒，分别是：
- 转移质粒（Transfer Plasmid）：包含目的序列，两侧有LTR，有助于整合到宿主基因组上。
- 包装质粒（Packaging Plasmid）：编码病毒的核心蛋白、复制所需的酶和基因表达调节因子等。在第三代系统中，这个质粒被进一步拆分为两个质粒，一个编码gag和pol，另一个编码rev。
- 包膜质粒（Envelope Plasmid）：通常编码VSV-G蛋白，用于替换env序列，提供病毒包装所需要的包膜蛋白。
2、安全性：第三代慢病毒系统在第二代的基础上进一步删除了tat基因，使得慢病毒基因保留更少，提高了安全性。同时，构建了自身失活的慢病毒载体，即删除了U3区的3’LTR，使载体失去HIV-1增强子及启动子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出RNA，理论上使得第三代慢病毒载体系统包出来的病毒比第二代的更加安全。
3、包装效率：虽然第三代系统更安全，但由于需要使用四个单独的质粒转染，因此操作更为复杂，且包装效率可能略低于第二代系统。
4、应用：第三代慢病毒包装系统适用于基因治疗或细胞治疗，因其更高的安全性而更受青睐。
5、病毒制备：将这四个质粒一起感染细胞，培养一段时间后收集上清中的病毒。
第三代慢病毒包装系统通过增加安全特性和改进设计，提供了一种更为安全的病毒载体制备方法，尤其适用于需要高安全性的基因治疗和细胞治疗领域。