AAV repcap质粒载体是用于腺相关病毒(AAV)包装过程中的关键组成部分。它负责表达AAV的Rep和Cap基因,这两个基因分别参与病毒的复制和衣壳蛋白的形成,决定了AAV的血清型和组织嗜性。Repcap质粒载体与编码病毒基因组的质粒(通常称为cis-plasmid或transfer plasmid)以及辅助质粒(helper plasmid)一起使用,以产生具有感染性的AAV颗粒。

Repcap质粒载体的具体用途包括:

1.表达Rep和Cap基因:Rep基因负责AAV生命周期中的多个步骤,包括DNA复制和调控;Cap基因编码病毒衣壳蛋白,这些蛋白构成AAV的外部结构。

2.决定AAV血清型和组织嗜性:不同的Repcap质粒载体可以产生不同血清型的AAV,每种血清型都有其特定的组织嗜性,这对于靶向特定细胞或组织至关重要。

3.与辅助质粒和转移质粒共同作用:在AAV的生产过程中,Repcap质粒载体与编码腺病毒E4、E2A和VA的辅助质粒以及编码病毒基因组的转移质粒一起转染到HEK293细胞中,以产生具有感染性的AAV颗粒。

4.三质粒系统:在AAV的生产中,通常使用三质粒系统,包括表达载体(包含ITR序列和外源基因)、Rep-Cap质粒(提供Rep和Cap基因)和辅助质粒(提供腺病毒基因以辅助AAV复制)。

Repcap质粒载体的选择对于AAV的生产和应用至关重要,因为它们直接影响到AAV的包装效率、感染能力和靶向性。通过选择不同的Repcap质粒,可以实现对特定细胞或组织的高效转导,这对于基因治疗和基因功能研究具有重要意义。