慢病毒细胞转染(Lentiviral Transduction)是一种利用慢病毒载体将外源基因(如报告基因、治疗基因或基因编辑工具)导入到宿主细胞中的过程。慢病毒载体来源于慢病毒,这是一种逆转录病毒,能够将其RNA基因组逆转录成DNA并整合到宿主细胞的基因组中。
以下是慢病毒细胞转染的一些关键点:
1.逆转录过程:慢病毒载体在宿主细胞内将RNA基因组逆转录成DNA。
2。整合到宿主基因组:逆转录后的DNA可以整合到宿主细胞的基因组中,使得外源基因能够在宿主细胞中长期稳定表达。
3.长期表达:由于整合到宿主基因组,外源基因可以在宿主细胞及其后代中长期表达。
4.低免疫原性:慢病毒载体经过改造,去除了病毒的致病基因,降低了宿主的免疫反应。
5.广泛的宿主范围:慢病毒载体可以转染多种类型的细胞,包括难以转染的细胞类型,如非分裂细胞。
6.高效率:慢病毒载体具有较高的转染效率。
7.安全性:慢病毒载体在制备过程中去除了病毒的复制和致病基因,使其在临床应用中相对安全。
8.应用广泛:慢病毒载体被广泛应用于基础研究、基因治疗和生物制药领域。
慢病毒细胞转染的步骤通常包括:
1.构建慢病毒载体:将目标基因插入到慢病毒载体中,构建重组慢病毒载体。
2.包装慢病毒颗粒:将重组慢病毒载体与包装质粒共转染到包装细胞中,产生慢病毒颗粒。
3.收集病毒颗粒:收集包装细胞培养上清中的慢病毒颗粒。
4.转染宿主细胞:将慢病毒颗粒与宿主细胞共培养,实现外源基因的转染和表达。
5.筛选和鉴定:通过抗生素筛选、流式细胞术等方法筛选和鉴定成功转染的细胞。
慢病毒细胞转染技术为基因功能研究、疾病模型构建和基因治疗提供了一种强有力的工具。