腺相关病毒(AAV)包装通常采用 HEK293 系列细胞,尤其是 HEK293T细胞。这些细胞系适合AAV包装,主要原因如下:
1、高效转染效率:HEK293细胞对质粒转染敏感,能高效地表达包装所需的基因。
2、具有E1基因:HEK293细胞含有腺病毒E1基因,可以补充AAV复制所需的辅助功能。
3、适合大规模培养:HEK293细胞生长迅速,容易扩增并适合悬浮培养,方便工业化生产。
包装过程中涉及的关键质粒
AAV包装一般需要以下三种质粒:
1、载体质粒:包含目的基因以及两侧的反向末端重复序列(ITR)。
2、包装质粒:提供AAV包装必需的 Rep 和 Cap 基因。
3、辅助质粒:提供腺病毒的辅助基因(如E2、E4、VA RNA),促进AAV病毒的复制与组装。
常用的包装系统
三质粒系统:目的基因质粒 + 包装质粒 + 辅助质粒,是常见的AAV包装方法。
二质粒系统:将包装质粒和辅助质粒合并成一个质粒,简化了操作步骤。
如果是生产级AAV,可能会进一步优化HEK293细胞系,例如使用稳定表达AAV辅助基因的细胞系。