AAV(腺相关病毒)体内注射前进行纯化的目的是为了确保病毒载体的质量、安全性和功能性,从而提高实验或治疗的效果,避免潜在的副作用。具体来说,AAV纯化的主要目的包括以下几点:

去除杂质
在AAV生产过程中,可能存在未包装的病毒基因组、宿主细胞蛋白质、DNA、培养基残留物等杂质。这些杂质会影响AAV的安全性,可能引起免疫反应或其他不良反应。

提高病毒滴度
纯化可以浓缩病毒颗粒,从而提高病毒的滴度。这对于治疗或实验中需要特定剂量的病毒载体至关重要。

确保病毒颗粒的功能性
通过纯化可以选择功能完整的病毒颗粒(例如具有目标基因的颗粒),避免将非功能性或空壳病毒注射到体内,从而提高传递目标基因的效率。

减少免疫反应
杂质或空壳病毒可能会增强宿主的免疫反应,通过纯化可以显著减少这些成分,从而降低免疫排斥的风险。

改善治疗效果
高纯度的AAV颗粒能够更有效地将基因递送至目标组织或细胞,从而提升基因治疗或研究的准确性和效率。

合规性和安全性
在临床应用中,符合GMP(Good Manufacturing Practice,良好生产规范)要求的纯化过程是强制性的,以确保患者的安全性和产品的一致性。

常用的AAV纯化方法包括超速离心(如CsCl或密度梯度离心)、柱层析(如离子交换柱或亲和层析柱),以及超滤浓缩等技术。这些方法可根据目标应用的需求选择合适的纯化策略。