慢病毒纯化是确保病毒具有高效性和纯度的重要步骤。
一、常用的慢病毒纯化方法：
1. 超速离心法（密度梯度离心）
原理：利用病毒颗粒与其他杂质在密度上的差异，通过超速离心分离病毒。
优点：纯度较高，可去除较多杂质。
缺点：操作复杂，可能影响病毒感染效率。
2. 超滤浓缩
原理：通过超滤膜将病毒颗粒浓缩，同时去除小分子杂质（如培养基成分和游离蛋白质）。
优点：操作简便，适合处理大体积样品。
缺点：病毒颗粒可能损失部分活性。
3. PEG沉淀法（聚乙二醇沉淀）
原理：利用PEG与病毒颗粒结合，促进病毒沉淀。
优点：成本低、操作方便。
缺点：纯度较低，需要后续纯化步骤。
4. 层析纯化
原理：通过层析柱（如阴离子交换、凝胶过滤）分离病毒颗粒和杂质。
优点：纯度高，可回收活性较强的病毒颗粒。
缺点：设备昂贵，操作较为复杂。
选择合适的方法
如果追求高纯度：超速离心和层析纯化更适合。
如果需求量大且成本有限：PEG沉淀或超滤浓缩更实用。
如果只是实验室用途且对纯度要求不高：可直接选择商业试剂套装。
需要注意的是，纯化后病毒的滴度和感染能力可能会有所下降，因此建议进行滴度测定（如qPCR或流式细胞术）确认效果。
二、慢病毒纯化作用
1. 去除杂质
在慢病毒的生产过程中，培养基中含有大量细胞碎片、未装载病毒的空壳、宿主细胞蛋白和核酸等杂质。通过纯化，可以去除这些杂质，提高慢病毒载体的纯度和安全性。
2. 提高病毒效价
慢病毒的纯化有助于浓缩病毒颗粒，从而提高病毒的效价。这对下游实验或应用（如基因转染、动物实验）非常重要，尤其是需要较高效价病毒的实验。
3. 提高实验稳定性
未纯化的慢病毒含有大量不必要的成分，可能会干扰实验结果。纯化后的病毒能够更精确地进行基因功能研究或其他下游实验。
4. 增强安全性
去除宿主来源的DNA/RNA和蛋白等污染物，可以减少宿主免疫反应或其他潜在的生物安全问题。
5. 延长病毒保存时间
纯化后的病毒通常会溶解在优化的缓冲液中，避免了杂质对病毒颗粒的降解作用，使得病毒更稳定，便于长期保存。