
慢病毒包装常用于基因编辑和基因治疗研究。慢病毒包装通常需要以下关键质粒(plasmid):
1. 表达质粒(Transfer Plasmid)
含有目标基因(GOI, gene of interest)的表达框架。
通常包含慢病毒的 5’LTR 和 3’LTR 序列,用于病毒基因组的包装和整合。
常见载体:pLenti 系列、pLV 系列等。
2. 包装质粒(Packaging Plasmid)
提供慢病毒的包装蛋白(如 Gag、Pol、Rev)的编码基因。
这些蛋白是病毒颗粒组装和基因组复制所必需的。
常见的包装质粒:psPAX2(来自第二代慢病毒系统)。
3. 包膜质粒(Envelope Plasmid)
编码包膜蛋白(Env),赋予病毒进入宿主细胞的能力。
最常见的是 pMD2.G,编码水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G),适用于多种细胞类型。
第二代与第三代系统的区别
第二代系统:
使用两种辅助质粒:psPAX2(包装质粒)和 pMD2.G(包膜质粒)。
优势:操作简单,适合大部分实验。
风险:包装和表达功能集中于单一质粒,潜在重组风险略高。
第三代系统:
使用三种辅助质粒:
包装质粒分为两个部分:Gag/Pol 和 Rev 分别提供。
单独的包膜质粒。
优势:安全性更高,适合临床研究。
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