在使用腺相关病毒(AAV)之前,正确的解冻步骤至关重要,以确保病毒载体的活性和效能不会受到影响。以下是解冻AAV的通用步骤:
1.准备工作
确保实验环境无菌,避免污染。
准备好装有病毒的冷冻管(通常储存于 -80℃)。
确保手头有干冰或预冷的冰盒以避免温度过高。
2.逐步解冻
快速解冻:将病毒冷冻管从 -80℃取出,立即置于 37℃水浴中。
注意:水浴中水位不能超过冷冻管盖,以防止污染。
轻轻晃动冷冻管,避免剧烈摇晃,以防损伤病毒颗粒。
3.监控解冻过程:解冻时间一般为 1-2 分钟,待冰块完全融化后立即从水浴中取出。
4.后续处理
解冻后,立即放置在冰上或冰盒中,避免温度升高。
如果病毒需要稀释或混合,操作时务必保持冰浴环境。
5.使用和储存
如果短时间内不使用全部病毒,可以将未使用部分重新分装为小体积(如10 µL或更小),并迅速置于 -80℃保存。
注意:避免多次冻融循环,多次冻融会显著降低病毒的感染效率。
注意事项
避免反复冻融,尽量在一次操作中完成所需剂量的制备。
解冻后尽快使用以确保病毒的高效活性。
始终保持无菌操作,尤其是在细胞实验或动物实验中。