是的,AAV(腺相关病毒)反复冻融可能会对其活性和稳定性产生不利影响,每次冻融都会导致病毒滴度降低约10%左右‌。以下是原因及建议:

反复冻融影响:

1.病毒颗粒的降解或聚集:冻融过程中,温度的剧烈变化可能导致病毒颗粒的结构被破坏或发生聚集,从而降低感染效率。

2.蛋白质变性:AAV的衣壳蛋白在反复冻融中可能发生变性,影响其稳定性和功能。

3.基因组的丢失或损伤:AAV的DNA在反复冻融时可能受到剪切或解离,从而影响基因传递效率。

4.效价降低:多次冻融会显著降低AAV的滴度,导致实验效果不稳定。

 

建议:

1.避免反复冻融:AAV在储存和使用时,应尽量避免反复冻融。一次分装为小体积(如单次实验用量)是一个有效的解决方案。

2.使用适当的缓冲液:在制备和储存AAV时,可选择稳定性较好的缓冲液(如添加甘油或其他稳定剂)以减少冻融损害。

3.快速处理:如果必须解冻,应迅速将AAV样品融化并立即使用,避免长时间暴露于室温或更高温度。

4.储存温度:AAV通常建议在-80°C储存,确保长期稳定性。

如果已经发生多次冻融,建议通过滴度测定或功能实验重新评估病毒的效价,确保实验数据的可靠性。