如果在 AAV 病毒包装过程中忘记换液(通常是指未及时更换培养基或未更换感染介质),可能会对病毒的产量和质量产生一定影响。以下是可能的后果以及补救措施:

可能的后果

1.细胞状态受损:(1)长时间不换液可能导致培养基中的营养耗尽,细胞生长状态变差,甚至出现死亡。

(2)废物和代谢产物的积累可能对细胞产生毒性。

2.病毒产量降低:细胞状态的恶化可能导致病毒的复制和包装效率下降,从而影响最终病毒的产量。

3.病毒质量下降:如果培养基中的废物过多,可能会干扰病毒的纯化,增加背景杂质。

 

补救措施

1.尽快换液:如果发现忘记换液,尽快更换培养基或加入新鲜的病毒生产培养基(例如无血清培养基)。

2.观察细胞状态:换液后观察细胞的形态,判断细胞是否健康。如果发现大量细胞凋亡,可以考虑终止实验并重新开始。

3.延长病毒收集时间:如果细胞状态还可以,可适当延长病毒的收集时间,确保病毒颗粒充分产生。

4.纯化时注意:在病毒纯化时,特别是用超速离心或柱层析分离病毒时,需要注意去除培养基中的杂质,以尽可能提高病毒质量。

 

未来建议

1.严格按照操作流程:建议在实验设计时详细记录每一步骤的时间点,例如换液时间、收集时间等,并设置提醒。

2.优化流程:如果是因为工作量大而忘记换液,可以考虑简化流程,例如采用培养基不需要频繁更换的系统。

3.监控细胞状态:定期显微镜观察细胞形态,确保操作过程中的细胞状态稳定。

如果细胞健康受损严重,可能无法挽回,此时重新包装病毒可能是更好的选择。