在使用腺相关病毒（AAV）载体在动物体内表达目的基因时，需要注意以下关键点：
1. AAV载体选择
血清型选择：AAV有多个血清型（如AAV1至AAV9及AAVrh系列），不同血清型具有不同的组织嗜性。例如：
AAV9：对中枢神经系统和心脏有高效传染能力。
AAV8：常用于肝脏靶向。
AAV5：对呼吸道和中枢神经系统有效。
根据实验需求选择适合的血清型以提高靶向性。
启动子选择：
使用合适的启动子可以控制目的基因的表达模式（组织特异性或全局表达）。
如：CMV启动子（强启动子，广泛表达）、hSyn（神经元特异性）、TBG（肝脏特异性）。
2. 病毒制备与纯化
高效生产：病毒的滴度（如GC/mL）直接影响表达效率。高滴度通常能提高体内转导效率。
纯化方法：通常采用PEG沉淀、CsCl梯度离心或FPLC方法纯化病毒以去除杂质和无功能颗粒。
病毒质量：确保病毒纯度和感染力，避免内毒素等污染。
3. 动物模型与注射途径
选择适合的动物模型：小鼠、大鼠、非人灵长类等动物模型的解剖结构和免疫系统差异可能会影响AAV表达效果。
注射途径：
静脉注射：适用于全身分布或肝脏表达。
腹腔注射：用于全身性表达。
局部注射：如脑室内、肌肉内、眼内注射，用于局部组织靶向。
鼻腔滴注：适用于中枢神经系统靶向。
4. 病毒剂量
剂量优化：过低的剂量可能无法达到表达效果，过高的剂量可能引发毒性反应。
剂量单位：通常以GC（基因组拷贝数）/体重（kg）计量，例如10^11~10^13 GC/kg。
5. 免疫反应
宿主免疫：AAV可能引发免疫反应，包括：
针对病毒衣壳蛋白的免疫反应。
针对外源基因表达产物的免疫反应。
应对方法：
选择低免疫原性的AAV血清型。
联合使用免疫抑制剂（如地塞米松、环孢素A）。
在实验前清除动物血清中的抗AAV中和抗体。
6. 基因表达的时效性
AAV为非整合型病毒，目的基因表达通常是长期的（数月至数年），但可能会随着细胞更新逐渐减少。
如果需要短期表达，可选择调节启动子或结合其他载体系统（如腺病毒）。
7. 实验设计和对照设置
阳性对照：确保目的基因成功表达。
阴性对照：排除背景表达和非特异性反应。
时间点采样：动态监测基因表达的效果和持续时间。