规范使用AAV病毒产品需要从实验室安全、操作规范、保存条件、废弃物处理等方面入手,以下是具体建议:
实验室安全与操作规范
1.操作环境:
AAV病毒操作应在BSL-2级别的生物安全柜中进行。如果使用普通超净工作台,需关闭排风机,避免病毒与外界环境接触。
操作时需穿戴实验服、口罩、护目镜和一次性手套。
2.操作过程:
操作时要小心,避免病毒飞溅或产生气溶胶。若污染台面,需立即用70%乙醇或1%SDS溶液擦拭。
使用密封性良好的离心管进行离心操作,离心后在生物安全柜内打开。
使用显微镜观察细胞感染情况时,需先拧紧培养瓶或盖紧培养板,用70%乙醇擦拭外壁。
3.废弃物处理:
接触过病毒的枪头、离心管、培养板等需用84消毒液(1:20)浸泡24小时或高压湿热灭菌处理后丢弃。
病毒保存与稀释
1.保存条件:
AAV病毒可在-80℃保存12个月,4℃保存不超过3天。
避免反复冻融,以免影响病毒滴度。
2.稀释方法:
病毒使用前需冰浴融化,并在冰上操作。
可使用Tris缓冲液、无菌PBS进行稀释。
实验设计与应用
1.感染细胞:
根据细胞类型和实验需求选择合适的MOI(感染复数)。
感染前需确保细胞状态良好,感染后需在适当条件下孵育。
2.体内应用:
注射时需注意注射部位和剂量,避免病毒泄漏。
对于携带致病基因或有害因子的AAV载体,需在更高级别的生物安全实验室操作。
安全培训与法规遵循
1.操作人员需经过生物安全培训,获得合格证书后方可进行实验。
2.实验过程中需严格遵守相关法规和实验室管理要求。
规范使用AAV病毒产品需从实验室安全、操作规范、保存条件、废弃物处理等方面入手,确保实验安全和数据可靠性。