
空壳AAV(即不包含目标基因组的病毒颗粒)在实验和基因治疗应用中可能带来多方面的影响,主要包括以下几个方面:
1. 降低治疗效率
空壳AAV不携带有效的基因负载,因此无法实现基因传递和表达。高空壳率会显著降低AAV载体的有效性,因为患者接收到的真正具有治疗功能的病毒颗粒减少。
2. 增加免疫原性
空壳AAV颗粒虽然不携带基因组,但仍然具有完整的衣壳蛋白,能够被免疫系统识别。大量空壳AAV的存在可能引发不必要的免疫反应,增加患者对AAV载体的免疫原性反应。
3. 影响产品纯度
空壳AAV的存在会降低病毒制剂的纯度,增加非活性成分的比例。这不仅影响AAV载体的传递效率,还可能干扰实验结果的解读。
4. 干扰实验结果
在实验中,空壳AAV可能与完整病毒颗粒竞争细胞表面的受体,从而抑制完整病毒颗粒的感染效率。这种竞争作用会进一步降低实验的准确性和可靠性。
如何避免空壳AAV的影响:
1.分离纯化:通过超速离心、柱层析等方法分离完整AAV和空壳AAV。
2.检测纯度:使用ELISA、透射电子显微镜(TEM)或核酸检测(如qPCR)确认病毒颗粒的纯度和比例。
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