用于动物体内实验的腺相关病毒（AAV）通常需要进行纯化与浓缩，以确保病毒的质量和实验结果的可靠性。以下是相关原因和步骤的简要说明：
为什么需要纯化与浓缩？
1.去除杂质：
AAV生产过程中可能含有宿主细胞碎片、未包装的DNA、蛋白质等杂质，这些可能引发动物免疫反应或干扰实验结果。
2.提高滴度：
动物体内实验通常需要较高浓度的病毒以确保足够的感染效率和实验效果。
3。改善安全性：
纯化后的病毒制剂减少了非目标物质的存在，从而降低对实验动物的毒性。
4.提高实验的可重复性：
高纯度和高浓度的病毒制剂能够使实验条件更加稳定，结果更具一致性。
常用的纯化与浓缩方法
1.纯化方法：
层析法： 使用阴离子交换层析、亲和层析（如Heparin柱）、或尺寸排阻层析。
密度梯度离心： 常用碘化铯（CsCl）或蔗糖密度梯度离心，可以有效分离完整病毒颗粒与杂质。
2.浓缩方法：
超滤法： 利用超滤离心管或超滤膜，浓缩病毒颗粒，同时去除小分子杂质。
聚乙二醇（PEG）沉淀： 利用PEG沉淀病毒后重悬，可初步浓缩病毒。
实验注意事项
1.检测纯化效果：
使用qPCR或ddPCR检测病毒基因组拷贝数。
2.保证病毒活性：
操作过程中避免高温、强剪切力，以防损伤病毒颗粒。
3.储存条件：
纯化浓缩后的病毒应根据需求分装，-80°C保存以延长稳定性。
对于动物体内实验，AAV病毒的纯化与浓缩是非常必要的。这不仅能保证实验结果的可靠性，还能降低对实验动物的副作用，提高整体实验效率。
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