
除了荧光蛋白标记外,AAV病毒还可以通过以下多种方法进行标记和检测:
1. 酶联免疫吸附测定(ELISA)
ELISA通过特异性抗体检测AAV衣壳蛋白,从而定量病毒颗粒的总数。这种方法简单快速,成本较低,适合高通量样本检测。但ELISA无法区分空壳病毒颗粒和含有基因组的完整病毒颗粒。
2. 透射电子显微镜(TEM)
TEM可以直接观察AAV病毒颗粒的形态,区分空壳和完整病毒颗粒。通过负染色技术,完整病毒颗粒和空壳颗粒在显微镜下呈现不同的形态,从而实现半定量分析。这种方法的优点是直观,但成本较高,且依赖于操作人员的经验。
3. 分析型超速离心技术(AUC)
AUC可以精确表征AAV样本中不同组分的异质性,包括空壳颗粒、部分包装基因组的颗粒和完整病毒颗粒。通过沉降系数的差异,AUC可以定量分析各组分的相对含量。
4. 纳米粒子跟踪分析(NTA)
NTA通过测量病毒颗粒的散射光或荧光来计数病毒颗粒。这种方法操作方便,重复性强,但需要专门的仪器设备。
5. 流式细胞术
流式细胞术用于检测AAV感染细胞后表达的荧光蛋白,从而计算感染性滴度。这种方法直观且可定量感染率,但依赖于报告基因。
6. qPCR和ddPCR
qPCR和ddPCR通过检测AAV基因组的拷贝数来定量病毒滴度。qPCR适用于高通量检测,而ddPCR具有更高的精确度。
7. TCID50(组织培养感染剂量法)
TCID50通过观察AAV感染细胞后的细胞病变效应(CPE)或荧光蛋白表达来计算感染性滴度。这种方法直接反映病毒的感染能力,但操作复杂,耗时较长。
不同的标记和检测方法各有优缺点,选择合适的方法需要根据实验需求和资源条件。例如,ELISA和qPCR适合高通量检测,TEM和AUC提供更直观的病毒颗粒信息,而流式细胞术和TCID50则更适合评估病毒的感染性。
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