
过表达慢病毒转染细胞后,基因的表达通常可以在 24-48 小时 内开始检测到,但最佳检测时间通常是 72 小时或更长,具体取决于以下因素:
1.病毒滴度:高滴度病毒感染更快,基因表达可能更早出现。
2.细胞类型:不同细胞的感染效率不同,影响表达时间。
3.启动子强度:使用强启动子(如 CMV 启动子)时,基因表达通常更快、更强。
4.检测方法灵敏度:荧光报告基因(如GFP)可能在24小时通过流式或显微镜观察,而低丰度蛋白需更长时间。
检测方法:
1.荧光蛋白(如 GFP):通常 24-48 小时后可用荧光显微镜观察到。
2.qPCR:一般在 48-72 小时后可进行 RT-qPCR 分析。
3.蛋白水平检测(Western Blot、ELISA):通常在 72-96 小时后进行,蛋白表达稍滞后于 mRNA。
实验建议
初步检测时间点:建议在转染后48小时开始检测,72小时为常见高峰。
优化策略:若未检测到表达,可延长至96小时或验证感染条件(MOI、细胞状态)。
大多数情况下,基因表达在转染后48-72小时可被检测到,建议在此窗口期进行初步分析,并根据具体实验条件调整时间点。
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