AAV（腺相关病毒）载体因其低免疫原性、较广的宿主范围及稳定的基因表达特性，被广泛应用于基因治疗和基因编辑领域。在设计AAV载体时，需要综合考虑多个因素，以优化其基因传递效率、安全性和组织特异性。
1. 衣壳血清型选择
AAV有多个血清型，不同的血清型在不同组织和器官中的转导效率不同。选择合适的血清型有助于提高靶向性和转导效率：
AAV1、AAV9：高效转导肌肉组织和心脏
AAV2：经典的血清型，偏向肝脏、神经元
AAV5：肺和中枢神经系统（CNS）
AAV8、AAV9：高效转导肝脏
AAV-PHP.B、AAV-PHP.eB：高效穿透血脑屏障，用于神经系统
此外，还可以通过 衣壳工程（如定向进化、理性设计）优化AAV的组织靶向性。
2. 启动子选择
启动子决定了基因的表达水平和特异性，应根据目标组织和细胞类型选择：
泛表达启动子（如 CAG、CMV）：适用于多种细胞类型，但在某些组织（如神经系统）可能沉默
组织特异性启动子：
肝脏：TBG（甲状腺结合球蛋白启动子）、HLP（人肝特异启动子）
神经元：Syn（突触素启动子）、hSYN1、CamKII（钙调蛋白激酶II启动子）
肌肉：CK8（肌酸激酶启动子）、MCK（肌肉特异启动子）
视网膜：RHO（视杆细胞特异启动子）、RPE65（视网膜色素上皮特异）
3.大基因装载策略
双载体系统：
重叠载体：两载体携带部分重叠序列，通过同源重组恢复全长基因。
反式剪接载体：利用ITR介导的剪接机制连接两个载体（适用于<5 kb基因）。
非病毒元件压缩：使用更小的启动子或缩短polyA信号。
4. 免疫逃避策略
AAV在体内可能引发免疫应答，影响疗效：
血清型切换（Serotype Switching）：针对已存在抗体的个体，可更换不同AAV血清型
衣壳突变（Capsid Engineering）：减少抗体结合位点（如Tyrosine突变提高免疫逃避）
免疫抑制策略：如短期使用皮质类固醇（如泼尼松）抑制免疫反应
5. 生产优化
质粒系统：
三质粒系统（AAV基因组质粒、Rep/Cap质粒、辅助质粒）。
稳定生产细胞系（如HEK293-TRex）。
提高滴度：
优化Rep/Cap比例，使用嵌合Rep蛋白（如Rep2/Rep68混合）。
辅助病毒（如腺病毒或HSV）提供复制信号。
纯化工艺：
碘克沙醇梯度离心、亲和层析（如AVB Sepharose）。
AAV载体的设计涉及多方面优化，包括血清型选择、启动子、基因载量、免疫逃避、安全性等。根据目标应用（如肝脏、CNS、肌肉、眼部疾病）制定相应策略，结合衣壳工程、基因表达调控和生产优化，可显著提高基因治疗的效率和安全性。
关于派真
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