慢病毒(lentivirus)转染过程中,换液时间的选择对转染效率和细胞活性都有重要影响。以下是常见的换液时间点及其考虑因素:
一般推荐的换液时间:
转染后 8–24 小时之间换液,具体如下:
换液时间 | 适用情况 | 优点 | 缺点 |
8 小时 | 对病毒较敏感的细胞(如神经元、干细胞) | 减少病毒毒性,提高细胞活力 | 可能影响转染效率 |
12–16 小时 | 多数常规细胞系(如HEK293T、HeLa) | 在效率与细胞活力间取得平衡 | — |
24 小时 | 对病毒毒性耐受的细胞 | 最大化转染效率 | 某些细胞可能状态变差 |
注意事项:
浓度决定毒性:MOI(multiplicity of infection)越高,病毒对细胞的毒性越大,越建议早换液。
可加PolyBrene:转染时常加入Polybrene 增加病毒进入效率,但也可能增强毒性。
观察细胞状态:如果细胞贴壁不稳、形态变化明显,可提前换液。
Spinfection(离心增强转染):如采用,转染时间一般较短(2–6 小时后即可换液)。