检测腺相关病毒(AAV)体内感染情况通常是为了确认病毒是否成功递送并表达了目标基因。常用方法如下:

🧪 一、荧光/发光信号检测(适用于标记基因如GFP/Luciferase)

1. 小动物活体成像(IVIS)

  • 适用情景:携带GFP、Luc、mCherry等报告基因的AAV。

  • 优点:非侵入、可多次追踪病毒表达动态。

  • 方法

    • Luc:注射D-luciferin后成像;

    • GFP/mCherry:直接检测荧光信号。

2. 组织切片荧光检测

  • 样本:采集组织器官,制备冰冻切片或石蜡切片。

  • 检测:显微镜下观察报告基因表达。

 

🧬 二、核酸水平检测

3. qPCR(定量PCR)

  • 检测内容:AAV载体基因组(如GFP、目标基因)在组织DNA中的拷贝数。

  • 适用:判断AAV是否成功感染、进入细胞并维持。

4. RT-qPCR

  • 检测内容:目标转录本(mRNA)水平。

  • 说明:确认目标基因是否被转录表达。

 

🧫 三、蛋白水平检测

5. Western blot / ELISA

  • 样本:感染组织或血清。

  • 用途:检测目标蛋白是否表达(需有相应抗体)。