检测腺相关病毒(AAV)体内感染情况通常是为了确认病毒是否成功递送并表达了目标基因。常用方法如下:
🧪 一、荧光/发光信号检测(适用于标记基因如GFP/Luciferase)
1. 小动物活体成像(IVIS)
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适用情景:携带GFP、Luc、mCherry等报告基因的AAV。
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优点:非侵入、可多次追踪病毒表达动态。
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方法:
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Luc:注射D-luciferin后成像;
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GFP/mCherry:直接检测荧光信号。
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2. 组织切片荧光检测
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样本:采集组织器官,制备冰冻切片或石蜡切片。
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检测:显微镜下观察报告基因表达。
🧬 二、核酸水平检测
3. qPCR(定量PCR)
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检测内容:AAV载体基因组(如GFP、目标基因)在组织DNA中的拷贝数。
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适用:判断AAV是否成功感染、进入细胞并维持。
4. RT-qPCR
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检测内容:目标转录本(mRNA)水平。
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说明:确认目标基因是否被转录表达。
🧫 三、蛋白水平检测
5. Western blot / ELISA
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样本:感染组织或血清。
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用途:检测目标蛋白是否表达(需有相应抗体)。