AAV包装后，病毒如何存储和稳定

AAV包装后的病毒需要在适当的条件下进行存储和稳定，以保持其感染能力、纯度和功能，确保在后续实验或临床应用中的有效性。

1. 温度控制：

• 低温存储：

  • AAV病毒通常-80°或更低的温度下进行存储。低温有助于保持病毒颗粒的稳定性，防止病毒的降解或失活。

  • -20°C也可以作为短期存储的温度，但长期存储最好-80°下进行。

• 冻干存储：

  • 对于需要长期保存或运输的AAV病毒，可以选冻干（lyophilization技术。冻干过程将病毒颗粒中的水分去除，使病毒能够在常温下稳定保存。

  • 冻干的AAV病毒需要在干燥、阴凉、避免光照的地方保存，并且在复溶时要小心操作，以防病毒失活。

2. 冷冻保护剂的使用：

• 添加冷冻保护剂：

  • 在AAV病毒存储前，通常会添加甘油（glycerol）等冷冻保护剂。这些冷冻保护剂能够帮助保持病毒颗粒的结构，减少冻融过程中的损伤。

  • 通常，冷冻保护剂的浓度5% – 10之间，根据病毒样品的具体情况进行调整。

3. 避免反复冻融：

• 冻融循环：

  • 反复的冻融循环可能会导致AAV病毒的颗粒降解，降低其转导效率。因此，尽量避免病毒样品的冻融循环，使用时应采取分装策略，将病毒分成小瓶，避免反复开封和冻融。

4. 保存液体和冻干样品的差异：

• 液体存储：

  • 在液体状态下存储AAV病毒时，确保在适当的低温下保存，同时保持病毒样品的pH值在稳定范围内。一般来说，AAV病毒在pH 7.0 – 8.0的缓冲溶液中较为稳定。

• 冻干病毒的保存：

  • 对于冻干的AAV病毒，需要注意保存时的温湿度条件，尽量避免暴露在高温或潮湿的环境中，这有助于病毒颗粒保持其活性。

5. 保存期和稳定性：

• 短期存储：

  • 对于实验室用途，AAV病毒可以在-20°C至-80°C之间存储几个月。对于临床试验用的病毒，可能需要经过更加严格的稳定性测试，确保长期存储后病毒的质量和功能。

• 长期稳定性：

  • 研究表明，如果在低温下（尤其是-80°C或更低）储存，AAV病毒的稳定性较好，且在正确的冷冻条件下，病毒可以保持数个月到数年而不失活。

• 冻干样品：

  • 冻干的AAV病毒在适当的条件下可以保存几年。冻干样品应避免暴露在湿气、阳光直射和高温环境中。

6. AAV病毒的质量控制：

• 在存储过程中，定期进行病毒滴度检测和纯度分析。这些检测有助于确保病毒样品的质量和稳定性，包括通过qPCR（定量PCR）检测AAV基因的数量、Western blot等方法检测蛋白质表达水平。

• 内毒素检测：AAV病毒的内毒素含量也需定期检测，确保其符合临床应用的安全标准。

7. 存储容器的选择：

• 低温冷冻管：

  • 存储AAV病毒时，使用适合低温的无菌冷冻以避免冻融过程中容器破裂。冷冻管应具备良好的密封性，防止病毒样品受到污染。

• 冻干瓶：

  • 对于冻干样品，使用冻干瓶或密封容器存储，这些容器可避免水分进入并保持稳定。