
1. 转移质粒(Transfer Plasmid)
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定义:转移质粒包含目标基因(通常是需要转导到靶细胞的基因)以及病毒载体的特定序列。这些序列通常包括病毒的包装信号(例如AAV的ITR序列)和转导所需的调控元件(如启动子、增强子等)。
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作用:转移质粒的主要作用是携带并转移目标基因。它通常不包含病毒的包膜蛋白编码序列,目的是为了让包装质粒和包膜质粒提供病毒的其他必需成分。通过这种方式,转移质粒与其他质粒配合使用,可以生成能够携带目标基因的病毒颗粒。
2. 包膜质粒(Envelope Plasmid)
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定义:包膜质粒是指编码病毒包膜蛋白的质粒。在病毒载体的生产中,包膜蛋白负责病毒的外壳形成以及与宿主细胞受体的结合。不同血清型的AAV使用不同的包膜蛋白,因此包膜质粒的类型决定了载体的组织特异性和进入宿主细胞的效率。
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作用:包膜质粒的作用是提供病毒的包膜蛋白,这些蛋白将病毒颗粒包裹并使其能够进入目标细胞。包膜质粒一般不含有目标基因,而是专注于病毒外壳的构建和对细胞的结合。
3. 包装质粒(Packaging Plasmid)
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定义:包装质粒包含病毒的必要序列,这些序列可以使病毒基因组在宿主细胞中复制和装配。包装质粒通常包括病毒的包装信号和一些辅助序列(如帮助转录的元件),但不会包含病毒的包膜蛋白。
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作用:包装质粒的作用是帮助病毒基因组的包装过程,通常提供一些必要的辅助因子,使得转移质粒中的目标基因能够在宿主细胞内得到合成、包装和形成成熟的病毒颗粒。包装质粒的主要功能是确保病毒的基因组能够在宿主细胞内有效地复制和包装成病毒颗粒。
三者的协同作用:
在病毒载体系统(如AAV病毒载体)中,通常需要三种质粒的协同作用才能成功地生产病毒颗粒:
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转移质粒提供目标基因。
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包膜质粒提供病毒的包膜蛋白,决定病毒的组织特异性。
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包装质粒提供病毒基因组所需的其他必要元件,确保病毒颗粒的正确包装。
这些质粒在体外共转染到生产细胞(如HEK293T细胞)中,通过细胞的机制共同生成能够包装目标基因的病毒颗粒。
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