一、基本概念区别
| 项目 | AAV(野生型) | rAAV(重组AAV载体) |
| 基因组 | 含有 rep 和 cap 基因(可复制) | rep、cap 被外源基因和包装系统代替(不可复制) |
| 主要用途 | 病毒生物学研究(如血清型差异、组织嗜性) | 基因载体,用于基因治疗或科研转导 |
| 是否具备感染复制能力 | 需要辅助病毒(如腺病毒)才能复制 | 不能自主复制,只能感染、转导目的基因 |
二、筛选目的不同
| 筛选对象 | 筛选目的 |
| AAV病毒筛选 | 研究不同血清型或变异株的感染特性、组织嗜性、免疫反应等。 |
| rAAV载体筛选 | 找出最适合特定组织/细胞转导的载体版本(血清型 + 启动子 + 基因构建)。 |
例如:
-
AAV筛选:比较 AAV1、AAV2、AAV9 对不同组织的天然感染能力。
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rAAV筛选:比较 rAAV2-CMV-GFP、rAAV9-hSyn-GFP、rAAV-PHP.eB-CAG-GFP 在神经元中的转导效率。
三、筛选方法不同
| 步骤 | AAV筛选 | rAAV载体筛选 |
| 病毒制备 | 从自然样本或突变库中分离AAV | 通过包装系统(2或3质粒系统)生产rAAV |
| 感染实验 | 感染不同细胞或动物组织,观察感染率 | 感染靶细胞或动物,检测报告基因表达(如GFP、Luciferase) |
| 结果检测 | 测定病毒DNA复制量或抗体反应 | 通过荧光、免疫染色或qPCR检测转导效率 |
| 优化方式 | 筛选自然血清型或人工突变体 | 优化血清型、启动子、增强子或插入序列等 |
四、评价指标不同
| 指标类别 | AAV筛选常用指标 | rAAV载体筛选常用指标 |
|---|---|---|
| 感染效率 | 病毒进入细胞的比例 | 转导表达量(GFP亮度、Luc活性) |
| 组织特异性 | 哪些组织被感染 | 哪些组织能表达目的基因 |
| 安全性 | 是否引发免疫反应 | 是否低免疫性、低毒性 |
| 稳定性 | 病毒颗粒稳定性 | 基因表达持续时间与一致性 |
AAV筛选 是研究天然或人工变异病毒的感染与生物学特性;
rAAV载体筛选 则是为了找到最合适的载体系统,实现高效、安全的基因递送。
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