当目的基因（GOI）过大时，使用慢病毒（Lentivirus）进行包装确实会遇到限制。
一、慢病毒载体的基因长度限制
慢病毒的最大包装容量约为 8~9 kb（千碱基），包括载体本身的所有序列（如 LTR、ψ 包装信号、启动子、选择标记等）
一般来说：
| 类型 | 推荐长度（包括所有元件） |
|---|---|
| 理想包装大小 | ≤ 7 kb |
| 可接受上限 | ≤ 9 kb |
| 超过 9 kb | 病毒滴度显著下降，甚至无法形成完整颗粒 |
超过上限后，病毒颗粒装载 RNA 的效率急剧降低，导致滴度下降、感染率低或根本不表达。
二、目的基因太大导致的问题
-
产量低：病毒颗粒生成效率下降。
-
感染力差：由于 RNA 包装不完全，感染后无法整合。
-
表达不稳定：部分整合不完全或丢失片段。
三、解决策略
1. 缩短载体总长度
-
选择更短的启动子（如 EF1α short、PGK 替代 CMV）
-
删除不必要的筛选标记或荧光蛋白
-
使用单功能载体（只保留必需元素）
2. 拆分为两个载体（Split system）
将大基因分成两部分，分别包装到两个慢病毒载体中，通过以下方式在宿主细胞内重新拼接：
-
重叠序列重组（overlap recombination）
-
重组酶系统（如 Cre/LoxP、Flp/FRT）
-
双AAV式拼接系统（类似双AAV的 trans-splicing 或 overlap 方法）
3. 使用其他病毒系统
当基因长度超过 9 kb 时，建议改用：
-
腺病毒（Adenovirus）：包装容量可达 30~35 kb
-
AAV 双载体系统（若需长期表达但基因仍过大）
关于派真
作为一家专注于AAV 技术十余年，深耕基因治疗领域的CRO&CDMO，派真生物可提供从载体设计、构建到 AAV、慢病毒和 mRNA 服务的一站式解决方案。凭借深厚的技术实力、卓越的运营管理和高标准的服务交付，我们为全球客户提供一站式CMC解决方案，包括从早期概念验证、成药性评估到IIT、IND及BLA的各个阶段。
凭借我们独立知识产权的π-alphaTM 293 细胞AAV高产技术平台，我们能将AAV产量提高多至10倍，每批次产量可达1×10¹⁷vg，以满足多样化的商业化和临床项目需求。此外，我们定制化的mRNA和脂质纳米颗粒（LNP）产品及服务覆盖药物和疫苗开发的各个阶段，从研发到符合GMP的生产，提供端到端的一站式解决方案。
